何俊
- 作品数：8 被引量：26H指数：3
- 供职机构：华南农业大学兽医学院更多>>
- 发文基金：广东科技计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学轻工技术与工程化学工程更多>>
- 抗菌肽Cecropin D基因在毕赤酵母中的表达与抗菌活性分析被引量：8
- 2011年
- 为使抗菌肽Cecropin D在巴斯德毕赤酵母中高效表达,本研究根据Cecropin D全基因序列和毕赤酵母的偏嗜性设计合成4条寡聚西核苷酸,SOEing-PCR技术法合成Cecropin D基因序列,并克隆至酵母表达载体pGAPZαA中,构建重组表达质粒,将其线性化后电击转化毕赤酵母菌株SMD1168,经高浓度博莱霉素筛选,获得高拷贝转化子,菌液PCR鉴定表明Cecropin D基因已整合到酵母基因组中。在GAP强启动子调控下,重组Cecropin D高效分泌表达,产物耐高温耐酸碱,并对部分革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌均有抑菌效果,对E.coliDH5α和S.aureus Cowan I株的MIC值分别为2.17μg/mL和4.55μg/mL。
- 郭春和焦茂兴何俊刘德辉黄毓茂
- 关键词：抗菌肽CECROPIN毕赤酵母抗菌活性
- 一种抗菌肽plectasin的高效生产方法及应用
- 本发明公开了一种抗菌肽plectasin的高效生产方法及应用，通过构建pGAPZαA-plectasin真核表达载体转化宿主细胞毕赤酵母，构建表达工程菌，发酵培养表达工程菌后将表达培养基离心处理得到上清液即为纯化得到抗菌...
- 黄毓茂刘德辉何俊
- 文献传递
- 猪乳铁蛋白N叶(PLF-N)在毕赤酵母中的表达及抑菌活性鉴定被引量：2
- 2011年
- 根据猪乳铁蛋白N叶(PLF-N)的蛋白序列和毕赤酵母(Pichia pastoris)密码子的偏嗜性,通过全基因合成法合成改造后的PLF-N基因片段,将其克隆到pGAPZα-A质粒中构建分泌型重组酵母表达载体pGAPZα-A-PLF。pGAPZα-A-PLF通过限制性内切酶AvrⅡ酶切线性化后,经电穿孔法转入毕赤酵母细胞SMD1168内。PCR检测结果发现,PLF-N基因与毕赤酵母染色体稳定结合,Zeocin抗性筛选,得到高拷贝转化子。在GAP启动子调控下,PLF-N重组蛋白获得分泌表达,其分子质量约为38ku,上清表达量约为364μg/mL。琼脂糖孔穴扩散法检测结果显示,该表达产物对革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌均具有较好的抑菌活性,且对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌最小抑菌浓度(MIC)分别为12.5、25.0μg/mL。
- 何俊刘德辉林云雄张春红黄毓茂
- 关键词：毕赤酵母分泌表达抑菌活性
- 抗菌肽LL-37在毕赤酵母SMD1168中的高效表达及活性鉴定被引量：16
- 2010年
- 为获得高效表达的抗菌肽LL-37,根据人源抗菌肽LL-37的氨基酸序列,选择毕赤酵母(Pichia pastoris)密码子的偏嗜性,通过SOEing法改造合成LL-37基因片段,克隆到pGAPZαA质粒中,获得分泌型重组酵母表达载体pGAPZαA-LL-37。pGAPZαA-LL-37通过限制性内切酶AvrII酶切线性化后,经电穿孔法转入毕赤酵母细胞SMD1168。经Zeocin抗性筛选,得到高拷贝转化子,PCR检测表明LL-37基因与毕赤酵母染色体稳定结合。在GAP启动子调控下,LL-37蛋白获得分泌表达,其上清表达量约为237mg/L。表达产物耐热性强,在100℃条件下30min内仍保持一定的抗菌活性。表达产物对大肠杆菌DH5α、大肠杆菌D31和猪链球菌的最小抑菌浓度(MIC)分别为1.56μg/mL、3.12μg/mL和6.25μg/mL。
- 刘德辉何俊林云熊黄毓茂
- 关键词：基因设计活性鉴定
- 环状抗菌肽cyclopsychotride在毕赤酵母X-33中的表达及其活性鉴定被引量：3
- 2011年
- 为提高重组外源蛋白在毕赤酵母中的高效表达,试验采用毕赤酵母(Pichia pastoris)偏嗜性密码子改变抗菌肽cyclopsychotride的碱基序列,通过SOEing法合成后连接到pPICZα-C质粒上,从而获得分泌型重组酵母表达载体pPICZα-C-cyclopsychotride,再通过限制性内切酶BlnⅠ线性化,经电穿孔法转入毕赤酵母细胞X-33中。结果表明:经PCR检测后及Zeocin抗性筛选,获得高拷贝转化子;通过琼脂孔穴扩散法检测,酵母表达上清液对革兰阳性菌和革兰阴性菌有抑菌活性;抗菌肽cy-clopsychotride经沸水、酸碱及胃蛋白酶处理后仍具有抗菌活性。
- 林云雄刘德辉何俊张承勇黄毓茂
- 关键词：毕赤酵母抑菌试验
- 猪小肠抗菌肽PR39在毕赤酵母中的分泌表达及其生物活性研究
- 抗生素已经成为临床治疗病原感染的有力武器,同时还作为畜禽饲料添加剂在畜禽疾病预防和促生长方面发挥重要作用。但随着抗生素在畜禽养殖业的长期使用,几乎所有的常规抗生素都出现了相应的抗药性致病株系,致病菌的耐药性问题已经日益严...
- 何俊
- 关键词：抗菌肽毕赤酵母分泌表达抗菌活性发酵条件
- 猪胰高血糖素样肽-2在毕赤酵母中的表达被引量：1
- 2011年
- 胰高血糖素样肽-2（glucagon-like peptide-2,GLP-2）,是胰高血糖素原基因在小肠上皮组织中由L内分泌细胞表达翻译后并处理加工的产物之一。它作为一个促进小肠黏膜生长修复物质,通过促进绒毛高度和隐窝深度的增长,从而增加肠道营养吸收的面积,同时GLP-2具有恢复和维持小肠黏膜上皮屏障的完整性、促进小肠损伤后的修复等作用。因此,GLP-2在动物营养上的应用前景广阔。
- 张承勇梁梓森刘德辉何俊林云雄黄毓茂
- 关键词：胰高血糖素样肽-2毕赤酵母隐窝深度绒毛高度营养吸收黏膜上皮
- 猪小肠抗菌肽PR-39在毕赤酵母中的高效生产方法及应用
- 本发明公开了一种猪小肠抗菌肽PR-39在毕赤酵母中的高效生产方法及应用。本发明根据毕赤酵母的偏嗜性合成编码PR-39的DNA序列，连接表达载体pGAPZαA，构建pGAPZαA-PR-39真核表达载体；转化重组表达载体至...
- 黄毓茂何俊刘德辉
- 文献传递
