林云熊
- 作品数：1 被引量：16H指数：1
- 供职机构：华南农业大学兽医学院更多>>
- 发文基金：广东科技计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 抗菌肽LL-37在毕赤酵母SMD1168中的高效表达及活性鉴定被引量：16
- 2010年
- 为获得高效表达的抗菌肽LL-37,根据人源抗菌肽LL-37的氨基酸序列,选择毕赤酵母(Pichia pastoris)密码子的偏嗜性,通过SOEing法改造合成LL-37基因片段,克隆到pGAPZαA质粒中,获得分泌型重组酵母表达载体pGAPZαA-LL-37。pGAPZαA-LL-37通过限制性内切酶AvrII酶切线性化后,经电穿孔法转入毕赤酵母细胞SMD1168。经Zeocin抗性筛选,得到高拷贝转化子,PCR检测表明LL-37基因与毕赤酵母染色体稳定结合。在GAP启动子调控下,LL-37蛋白获得分泌表达,其上清表达量约为237mg/L。表达产物耐热性强,在100℃条件下30min内仍保持一定的抗菌活性。表达产物对大肠杆菌DH5α、大肠杆菌D31和猪链球菌的最小抑菌浓度(MIC)分别为1.56μg/mL、3.12μg/mL和6.25μg/mL。
- 刘德辉何俊林云熊黄毓茂
- 关键词：基因设计活性鉴定
