林丽霞
- 作品数：3 被引量：19H指数：3
- 供职机构：福建农林大学园艺学院园艺植物生物工程研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金福建省科技计划项目更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 龙眼体胚发生过程生长素响应因子DlARF5a的克隆及表达分析被引量：10
- 2014年
- 以龙眼松散型胚性愈伤组织为材料,采用RT-PCR和RACE技术克隆获得生长素响应因子ARF5acDNA全长序列,利用实时荧光定量法检测其在龙眼体胚不同发育时期的转录水平,并将其与绿色荧光蛋白(GFP)构建成亚细胞定位载体侵染洋葱表皮细胞。结果表明:龙眼ARF5a(命名为DlARF5a,GenBank登录号为KF739401)的cDNA序列全长为3 322bp,其中开放阅读框为2 829bp,212bp 5′非编码区,258bp 3′非编码区,编码942个氨基酸。生物信息学预测显示,DlARF5a编码蛋白具有B3、Auxin-resp和AUX-IAA保守区与结构功能域,中间区域富含谷甘氨酸、丝氨酸和亮氨酸,是一个定位于细胞质的具有促进转录活性功能的水溶性蛋白。系统进化树分析表明,该基因编码的氨基酸序列与大豆的亲缘关系最近。qRT-PCR检测显示,DlARF5a在龙眼球形胚和鱼雷形胚时期表达显著增强,而在6个发育阶段中子叶形胚的表达量最低,推测DlARF5a参与龙眼体胚中鱼雷胚时期的形态建成。共聚焦显微镜观察结果显示,未添加外源生长素IAA的DlARF5a蛋白定位于细胞质中,而经外源生长素处理的DlARF5a蛋白在细胞膜、细胞质和细胞核中均有表达,推测龙眼生长素响应蛋白DlARF5a能够响应外源生长素IAA而改变其在细胞中的空间位置。
- 林丽霞屈莹徐洋林玉玲赖钟雄
- 关键词：龙眼体细胞胚胎发生生物信息学实时荧光定量PCR亚细胞定位
- 龙眼胚性愈伤组织DlGRAS4与DlGRAS54基因的克隆及表达分析被引量：7
- 2014年
- 以龙眼松散型胚性愈伤组织为实验材料,采用RT-PCR结合RACE法,克隆了植物特异转录调控因子DlGRAS4和DlGRAS54的cDNA全长序列和DNA序列,并进行生物信息学以及表达分析。结果表明:DlGRAS4全长1 668bp,开放阅读框(ORF)1 296bp,编码431个氨基酸(GenBank登录号:KC127683);DlGRAS54全长2 113bp,ORF 1 659bp,编码552个氨基酸(GenBank登录号:KC127684);DlGRAS54的DNA序列在5′-UTR含有1个1 533bp的内含子。生物信息学分析表明:DlGRAS4和GRAS54是不稳定亲水蛋白,不含信号肽,具有跨膜结构和GRAS家族的保守结构域,亚细胞定位于细胞膜中;与毛果杨、葡萄、蓖麻和可可等具有较高的同源性。系统进化树分析显示,DlGRAS54与拟南芥AtPAT1、葡萄VvPAT1、毛果杨PtPAT1、大豆GmPAT1处于同一分枝;DlGRAS4与拟南芥AtSCL23、玉米ZmSCL23处于同一分枝。推测DlGRAS4和DlGRAS54是GRAS基因家族的成员。qPCR结果表明,DlGRAS4在整个发育阶段转录水平呈"W"型变化趋势,在球形胚和子叶形胚阶段的表达量达最大值;DlGRAS54在整个发育阶段的转录水平呈"M"型变化趋势,在球形胚和鱼雷形胚阶段表达量达最大值,表明DlGRAS4和DlGRAS54主要在发育的中晚期起作用。外源赤霉素处理后DlGRAS4和DlGRAS54的表达量明显上调,说明DlGRAS4和DlGRAS54对赤霉素处理能做出积极的反应。
- 陈裕坤林玉玲田奇琳林丽霞赖瑞联赖钟雄
- 关键词：龙眼体细胞胚胎发生GRAS生物信息学实时荧光定量PCR
- 龙眼胚性愈伤组织生长素响应因子DIARF5-1在不同激素处理下的定量表达分析被引量：3
- 2013年
- [目的]探讨外源生长素IAA、赤霉素、水杨酸、茉莉酸甲酯和乙烯利对龙眼胚性愈伤组织(emberogenic callus,EC)生长素响应因子DlARF5-1基因表达的影响。[方法]以龙眼EC为试材,利用实时荧光定量PCR法检测龙眼EC生长素响应因子DlARF5-1在不同激素处理下的表达情况。[结果]结果表明,龙眼EC生长素响应因子DlARF5-1对不同浓度的生长素、赤霉素、水杨酸、茉莉酸甲酯和乙烯利都有响应。DlARF5-1基因在1.0 mg/L IAA处理下的表达量高于对照水平,经12.0 mg/L GA3、75μmol/L SA、75μmol/L MeJA和30 mg/L乙烯利处理后,DlARF5-1基因的相对表达量较高,但都低于对照的表达量。[结论]外源生长素IAA可上调龙眼EC生长素响应因子DlARF5-1基因的表达,而外源赤霉素、水杨酸、茉莉酸甲酯和乙烯利对DlARF5-1基因的表达起负调控作用。
- 林丽霞林玉玲赖钟雄
- 关键词：龙眼胚性愈伤组织激素实时荧光定量PCR
