屈莹
- 作品数：2 被引量：11H指数：1
- 供职机构：福建农林大学园艺学院园艺植物生物工程研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金福建省科技计划项目更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 龙眼体胚发生过程生长素响应因子DlARF5a的克隆及表达分析被引量：10
- 2014年
- 以龙眼松散型胚性愈伤组织为材料,采用RT-PCR和RACE技术克隆获得生长素响应因子ARF5acDNA全长序列,利用实时荧光定量法检测其在龙眼体胚不同发育时期的转录水平,并将其与绿色荧光蛋白(GFP)构建成亚细胞定位载体侵染洋葱表皮细胞。结果表明:龙眼ARF5a(命名为DlARF5a,GenBank登录号为KF739401)的cDNA序列全长为3 322bp,其中开放阅读框为2 829bp,212bp 5′非编码区,258bp 3′非编码区,编码942个氨基酸。生物信息学预测显示,DlARF5a编码蛋白具有B3、Auxin-resp和AUX-IAA保守区与结构功能域,中间区域富含谷甘氨酸、丝氨酸和亮氨酸,是一个定位于细胞质的具有促进转录活性功能的水溶性蛋白。系统进化树分析表明,该基因编码的氨基酸序列与大豆的亲缘关系最近。qRT-PCR检测显示,DlARF5a在龙眼球形胚和鱼雷形胚时期表达显著增强,而在6个发育阶段中子叶形胚的表达量最低,推测DlARF5a参与龙眼体胚中鱼雷胚时期的形态建成。共聚焦显微镜观察结果显示,未添加外源生长素IAA的DlARF5a蛋白定位于细胞质中,而经外源生长素处理的DlARF5a蛋白在细胞膜、细胞质和细胞核中均有表达,推测龙眼生长素响应蛋白DlARF5a能够响应外源生长素IAA而改变其在细胞中的空间位置。
- 林丽霞屈莹徐洋林玉玲赖钟雄
- 关键词：龙眼体细胞胚胎发生生物信息学实时荧光定量PCR亚细胞定位
- 龙眼胚性愈伤组织Remorin家族成员的克隆及其在体胚发生过程中的表达分析被引量：1
- 2014年
- 以龙眼松散形胚性愈伤组织为材料,采用RT-PCR结合RACE法克隆Remorin家族5个成员的c DNA全长,Dl Remorin1全长2 127 bp,编码572个氨基酸;Dl Remorin2全长1 829 bp,编码444个氨基酸;Dl Remorin3全长1 937 bp,编码541个氨基酸;Dl Remorin4全长1 743 bp,编码466个氨基酸;Dl Remorin5全长1 043 bp,编码181个氨基酸。Dl Remorin1~5 DNA序列长度分别为:4 054、3 097、3 505、4 690和1 935 bp,所有内含子剪切位点均符合真核生物"GT-AG"规则。所有成员均是不稳定亲水性蛋白,都不具有信号肽,只有Dl Remorin1具有跨膜结构,都具有Remorin家族保守结构域,与其它植物的Remorin具有较高的同源性。系统进化树分析结果表明,Dl Remorin5为经典的Remorin蛋白,Dl Remorin1与Dl Remorin2属于长链Remorin。qRT-PCR结果显示,随着龙眼体胚的发育,Dl Remorin1的表达量呈类"N"状趋势,在心形胚时期和子叶形胚时期较高;Dl Remorin2在心形胚和子叶形胚时期迅速下降;Dl Remorin3在发育中后期迅速升高,并在子叶形胚时期最高;Dl Remorin4在球形胚和鱼雷形胚时期最低,而Dl Remorin5在不完全胚性紧实结构时期最低。说明Dl Remorin1~5在龙眼体胚发生过程的转录水平具有一定的组织特异性和时序性。ps RNA Target预测显示Dl Remorin还可能受到mi RNA家族的调控。
- 陈裕坤徐洋屈莹林玉玲姚文赖钟雄
- 关键词：龙眼体胚发生克隆QRT-PCR
