李玢
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
- 供职机构：广州中医药大学基础医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 过表达及定点突变缝隙连接蛋白Cx43小鼠黑色素瘤细胞模型的构建被引量：3
- 2014年
- 目的构建小鼠黑色素瘤细胞(B16)过表达野生型及点突变型缝隙连接蛋白43(Connexin43,Cx43)细胞模型,为以缝隙连接(Gap Junction,GJ)为靶点的中药复方、中药单药及药物单体的研究提供可靠阳性对照和阴性对照。方法构建野生型Cx43、突变型Cx43G21R、突变型Cx43G138R重组荧光蛋白融合慢病毒表达质粒,用定点突变技术获得Cx43G21R和Cx43G138R突变体,对上述3种质粒进行双酶切和测序鉴定,并分别包装病毒感染B16细胞,使B16细胞过表达野生型Cx43、突变型Cx43G21R、突变型Cx43G138R。Western blot检测Cx43蛋白表达水平变化,荧光示踪法观察缝隙连接通讯(Gap Junction Intercellular Communication,GJIC)功能变化。结果①酶切及测序证明,成功构建pLVCx43-mCherry、pLVCx43-mCherryG21R、pLVCx43-mCherryG138R重组荧光蛋白融合慢病毒表达质粒。②成功感染B16细胞并筛选稳定过表达Cx43、Cx43G21R、Cx43G138R细胞株,Western blot检测显示上述细胞株Cx43蛋白表达均高于对照组。③过表达野生型Cx43后B16细胞GJIC功能较对照组增强;过表达突变型Cx43后B16细胞GJIC功能较对照组减弱。结论过表达野生型Cx43可增强B16细胞GJIC功能,过表达突变型Cx43可抑制B16细胞GJIC功能。
- 李玢张广献刘娟赵青谭宇蕙吴映雅易华杜标炎
- 关键词：黑色素瘤细胞小鼠缝隙连接蛋白43定点突变缝隙连接通讯
- 薯蓣皂苷联合自杀基因对小鼠黑色素瘤细胞及其移植瘤的协同杀伤及机制
- 目的:探讨薯蓣皂苷(Dio)对小鼠B16细胞是否通过提高缝隙连接细胞通讯(GJIC)功能,增强自杀基因旁杀伤效应从而对自杀基因系统协同增效.
方法:1.双荧光素示踪流式细胞仪检测GJIC功能;2.Realtim...
- 肖建勇张广献李玢吴映雅刘喜娟丘鹏翔刘晶晶谭宇蕙杜标炎
- 关键词：黑色素瘤薯蓣皂苷实验药理自杀基因
