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zeb1基因与肿瘤细胞迁移能力的关系被引量：9: 2010年; 目的:探讨肿瘤细胞中zeb1基因的表达量与肿瘤细胞的迁移能力之间的关系.方法:实时定量PCR方法检测正常胃黏膜上皮细胞GES及四种肿瘤细胞BGC823、SGC7901、A549和HeLa细胞中zeb1基因的表达量;Transwell小室检测五种细胞的迁移能力.结果:在五种细胞中,zeb1在HeLa细胞中表达量最高,BGC823及SGC7901次之,在A549及GES中表达量最低;发生迁移的细胞数目在HeLa细胞中最多,BGC823及SGC7901其次,在A549及GES细胞中最少;线性相关分析表明,zeb1基因的表达量与细胞迁移能力呈正相关(r=0.961,P<0.01).结论:zeb1基因可能促进肿瘤细胞的迁移能力.; 宋永站张尤历乌慧玲孔梅陈鑫邵长江; 关键词：迁移肿瘤

幽门螺杆菌γ谷氨酰转肽酶同源基因的表达与活性检测: 2009年; 目的:评价幽门螺杆菌(Hpylori)ggt同源基因的结构特征和功能.方法:通过生物信息学软件分析Hpyloriγ谷氨酰转肽酶(ggt)同源基因产物的结构特征;提取HpyloriDNA,并以之为模板,采用PCR法扩增该基因的全长及去信号肽片段;进行序列分析后,将全长片段与gfp片段连接,分别克隆进杆状病毒的转移质粒pFastBac1中,利用杆状病毒的Bac-to-Bac系统分别获得重组杆状病毒的DNA;通过PCR方法验证这些片段克隆进杆状病毒;将重组病毒的DNA以脂质体为媒介转染家蚕细胞,以获得重组杆状病毒;分别收集这些重组病毒,并再感染家蚕细胞,进行蛋白表达实验和活性检测,以荧光显微镜观察融合蛋白在细胞中的分布.结果:通过PCR方法成功克隆了各种片段;测序的结果表明,未发生突变;基因片段扩增的结果说明,获得了3种重组的杆状病毒,且这3种重组病毒均表达了ggt片段,全长、去信号肽片段及去信号肽片段与gfp融合的片段的表达产物活性分别为3.61,10.50及9.31U/L.Westernblot的结果证实了去信号肽片段与GFP的融合表达.通过荧光显微镜观察去信号肽与gfp的融合片段的表达产物在细胞中的定位,荧光不具有区域的特异性,充满了整个细胞,表明该基因产物并非作用于专一的细胞器.结论:Hpyloriggt同源基因适合于杆状病毒表达,表达产物具有GGT活性,但他对细胞的作用有待进一步研究.; 孔梅张尤历陈鑫陈慧娟; 关键词：幽门螺杆菌谷氨酰转肽酶杆状病毒

幽门螺杆菌上皮接触诱导基因iceA1的克隆及序列特征: 2012年; 目的:克隆和分析镇江地区来源于不同疾病的(胃癌、溃疡和胃炎)幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)的表皮接触诱导基因iceA1.方法:从胃十二指肠疾病患者胃黏膜组织中分离培养获得H.pylori,PCR扩增检测iceA1基因,并克隆至pMD18-T载体上,进行测序和序列分析.结果:克隆和测序了镇江地区来源于不同疾病的(胃癌、溃疡和胃炎)共12株H.pylori的i c e A1基因片段,并与标准菌株60190比对,结果显示镇江地区的H.pylori的iceA1基因中存在着3处框内缺失突变热点(780del6、809del5、914del7),这些缺失突变在溃疡和胃炎中均存在,但是胃癌株只存在809del5.对缺失片段周围的序列进行分析,这些缺失序列的两端基本都与同向重复序列相连,这可能与复制过程中滑动错配的小片段缺失模型有关.结论:iceA1序列的变异性有可能作为分析H.pylori群体遗传学的有用工具.; 邵长江张尤历王文兵陈慧娟孔梅陈鑫宋永站; 关键词：幽门螺杆菌克隆分子标记

PUMA基因在胃癌组织及细胞中的表达被引量：8: 2010年; 目的:研究p53正向细胞凋亡调控因子(PUMA)基因的四种剪接体(PUMA-α,-β,-γ及-δ)在胃癌组织及细胞中的表达特点.方法:应用生物信息学分析PUMA基因四种剪接体的结构特点;同时利用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测胃癌组织、癌旁组织及不同胃癌细胞系BGC-823和SGC-7901细胞中四种剪接体的mRNA表达水平.结果:PUMA-α和-β在癌旁组织中表达阳性,但在癌组织中表达难以检测,差异显著(t=9.492,15.875,均P<0.05);PUMA-γ和-δ在癌旁及癌组织中均可见表达,且在癌旁组织中的表达量显著高于癌组织(t=4.823,4.056,P<0.05).PUMA-α,-γ及-δ在胃癌不同分化程度的细胞系BGC-823(低分化)及SGC-7901(中分化)中均有表达,但两细胞系间无统计学差异.而PUMA-β在BGC-823中的表达明显高于SGC-7901细胞(t=8.710,P<0.05).结论:PUMA四种剪接体在胃癌组织中的表达下调,与癌的发生呈负相关;PUMA-β的表达还可能与细胞的分化程度有关.; 陈鑫张尤历乌慧玲孔梅邵长江宋永站; 关键词：胃癌细胞凋亡

幽门螺杆菌尿素通道蛋白基因ureI的检测、克隆及序列分析被引量：1: 2009年; 目的:检测镇江地区幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hpylori)尿素通道蛋白基因ureI,并进行克隆和序列分析.方法:从胃十二指肠疾病患者胃黏膜组织中分离培养获得60例Hpylori,PCR扩增检测ureI基因,部分菌株的ureI基因克隆至pMD18-T载体上,进行测序和序列分析.结果:60例Hpylori菌株的ureI检出率为100%,成功克隆了8株来源于慢性胃炎、消化性溃疡和胃癌的Hpylori菌株ureI并进行了序列分析.结果表明不同来源Hpylori菌株之间ureI核苷酸和氨基酸序列同源性均高达95.6%以上.结论:ureI基因在Hpylori中高度保守,可以作为鉴定Hpylori的分子诊断标志.; 邵长江张尤历王文兵孔梅陈鑫宋永站; 关键词：幽门螺杆菌克隆分子标记

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陈鑫

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