刘同明
- 作品数：3 被引量：0H指数：0
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- 嗜碱芽孢杆菌NTT89启动子的克隆及其表达
- 2000年
- 报导了以启动子探测质粒 p KK2 32 - 8为载体克隆嗜碱芽孢杆菌 NTT89启动子的研究 .用限制性内切酶 Hind 分别消化嗜碱芽孢杆菌 NTT89染色体 DNA和质粒 p KK2 32 - 8,在体外重组 ,转化大肠杆菌 DH5 α感受态细胞 ,在含氨苄青霉素和氯霉素的选择性平板上筛选转化子 ,结果从 NTT89染色体 DNA中克隆到一系列带有启动子活性的 DNA片段 ,并在大肠杆菌中得到表达 ,这些转化子抗氯霉素水平在 34～ 5 0 0 mg/ L 不等 ,随机挑选10个转化子 ,提取其重组质粒进行限制性酶切 ,表明转化子中的重组质粒外源片段插入的效率很高 ,插入片段大小在 5 0 0～ 5 5 0 0 bp之间 ,通过地高辛标记的点杂交和 Southern杂交均证明重组质粒上插入的具启动子功能的 DNA片段来自于嗜碱芽孢杆菌的染色体 DNA.
- 王玲燕曹军卫刘同明张小青
- 关键词：启动子克隆基因表达
- 嗜碱细菌NTT36嗜碱基因的亚克隆及其在大肠杆菌和农杆菌中的表达
- 1999年
- 将大肠杆菌ＨＢ１０１嗜碱转化子中质粒ｐＧＣＡ所携带的嗜碱基因亚克隆至双元载体ｐＢＩ１２１质粒中，构建了植物表达载体ｐＬＧＣ重组质粒。用其转化大肠杆菌ＨＢ１０１获得了能在碱性和卡那霉素抗性平板上生长的转化子，再通过三亲交配法将亚克隆质粒ｐＬＧＣ转化进农杆菌ＬＢＡ４４０４，又获得能在碱性平板和卡那霉素及利福平双抗平板上生长的转化子，Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交结果表明ＨＢ１０１转化子亚克隆质粒ｐＬＧＣ是由来自于嗜碱芽孢杆菌ＮＴＴ３６染色体ＤＮＡ和双元载体ｐＢＩ１２１组成，且农杆菌ＬＢＡ４４０４转化子含有来自大肠杆菌亚克隆转化子的ｐＬＧＣ质粒。
- 刘同明曹军卫王玲燕刘阳俞雁寻
- 关键词：嗜碱芽孢杆菌农杆菌亚克隆植物表达载体
- 耐碱细菌NTT36耐碱基因的克隆及表达产物的分析
- 1998年
- 耐碱芽孢杆菌ＮＴＴ３６总ＤＮＡ经ＥｃｏＲＩ酶不完全消化，与质粒ｐＵＣ１８的ＥｃｏＲＩ酶切产物在体外重组后，转化大肠杆菌ＨＢ１０１．在碱性平板上直接筛选耐碱转化子，转化子经检测具有氨苄青霉素（Ａｍｐｒ）抗性，分析表明转化子具有１５ｋｂ大小的重组质粒．用此重组质粒转化大肠杆菌ＨＢ１０１、ＤＨ５α和ＸＬ１－Ｂｌｕｅ，均产生大量同时具有耐碱性和Ａｍｐ抗性的转化子．通过Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交和点杂交证明此重组质粒（定名为ｐＧＣＡ）由ｐＵＣ１８和ＮＴＴ３６总ＤＮＡ的片段组成．分别提取上述３种克隆转化子和ＮＴＴ３６细胞膜蛋白，进行ＳＤＳ－ＰＡＧＥ梯度凝胶电泳，发现在ｐＨ１０．６条件下培养的转化子和供体菌ＮＴＴ３６与在中性培养基中生长的转化子和受体菌相比，有５条多肽带有明显差异．表明这５条多肽带与耐碱性有关．
- 龚勇曹军卫刘同明
- 关键词：克隆基因表达
