张小青
- 作品数：2 被引量：26H指数：1
- 供职机构：武汉大学生命科学学院更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 嗜碱芽孢杆菌NTT89启动子的克隆及其表达
- 2000年
- 报导了以启动子探测质粒 p KK2 32 - 8为载体克隆嗜碱芽孢杆菌 NTT89启动子的研究 .用限制性内切酶 Hind 分别消化嗜碱芽孢杆菌 NTT89染色体 DNA和质粒 p KK2 32 - 8,在体外重组 ,转化大肠杆菌 DH5 α感受态细胞 ,在含氨苄青霉素和氯霉素的选择性平板上筛选转化子 ,结果从 NTT89染色体 DNA中克隆到一系列带有启动子活性的 DNA片段 ,并在大肠杆菌中得到表达 ,这些转化子抗氯霉素水平在 34～ 5 0 0 mg/ L 不等 ,随机挑选10个转化子 ,提取其重组质粒进行限制性酶切 ,表明转化子中的重组质粒外源片段插入的效率很高 ,插入片段大小在 5 0 0～ 5 5 0 0 bp之间 ,通过地高辛标记的点杂交和 Southern杂交均证明重组质粒上插入的具启动子功能的 DNA片段来自于嗜碱芽孢杆菌的染色体 DNA.
- 王玲燕曹军卫刘同明张小青
- 关键词：启动子克隆基因表达
- 枯草芽孢杆菌渗透压调节基因proB的克隆和表达被引量：26
- 2002年
- 用PCR扩增的方法从耐盐的枯草杆菌中克隆出一个 1 3kb长的DNA片段 ,经功能检测 ,证明正向插入片段与大肠杆菌的脯氨酸营养缺陷特性 (proB- )能够营养互补。含有该重组质粒的大肠杆菌DH5α在基本培养基上的耐盐能力从 2 %提高至 4%。通过引物步行法测定了该插入片段的核苷酸序列。利用DNAsis软件进行序列分析发现 ,该片段第 1 2 2～ 1 2 3 5bp核苷酸编码一个由 3 70个氨基酸组成的蛋白质分子 ,其上游存在非典型的 - 1 0区 ,典型的 -3 5区和核糖体结合位点 ,起始密码子处有最佳翻译起始效率的侧翼核苷酸序列。将其与Genebank中的已知基因的序列和编码的氨基酸序列进行同源性比较 ,结果表明该片段与枯草杆菌 1 6 8的核苷酸序列、氨基酸序列的同源性分别为 81 %和 90 %。证明该基因确实是一个proB基因。通过与三十个不同种属微芽生物proB基因的氨基酸序列比较 。
- 张小青曹军卫翟超陈建军
- 关键词：克隆
