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龚勇
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1
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武汉大学生命科学学院
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发文基金:
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相关领域:
生物学
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刘同明
武汉大学生命科学学院
曹军卫
武汉大学生命科学学院
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1998
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耐碱细菌NTT36耐碱基因的克隆及表达产物的分析
1998年
耐碱芽孢杆菌NTT36总DNA经EcoRI酶不完全消化,与质粒pUC18的EcoRI酶切产物在体外重组后,转化大肠杆菌HB101.在碱性平板上直接筛选耐碱转化子,转化子经检测具有氨苄青霉素(Ampr)抗性,分析表明转化子具有15kb大小的重组质粒.用此重组质粒转化大肠杆菌HB101、DH5α和XL1-Blue,均产生大量同时具有耐碱性和Amp抗性的转化子.通过Southern杂交和点杂交证明此重组质粒(定名为pGCA)由pUC18和NTT36总DNA的片段组成.分别提取上述3种克隆转化子和NTT36细胞膜蛋白,进行SDS-PAGE梯度凝胶电泳,发现在pH10.6条件下培养的转化子和供体菌NTT36与在中性培养基中生长的转化子和受体菌相比,有5条多肽带有明显差异.表明这5条多肽带与耐碱性有关.
龚勇
曹军卫
刘同明
关键词:
克隆
基因表达
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