李小灵
- 作品数：5 被引量：1H指数：1
- 供职机构：华东理工大学生物工程学院生物反应器工程国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生化学工程更多>>
- 土豆环氧化物水解酶基因的克隆、表达及其活性包涵体分析
- 2012年
- 目的克隆、表达土豆环氧化物水解酶基因,分析其活性包涵体。方法提取土豆总RNA,以反转录获得的cDNA为模板进行聚合酶链式反应(PCR),扩增得到土豆环氧化物水解酶基因,构建大肠杆菌表达质粒pET-P.EH,将重组表达质粒pET–P.EH转化E.coli BL21(DE3)。结果 SDS-PAGE分析表明,IPTG诱导表达的重组土豆环氧化物水解酶在各种温度下均主要以包涵体形式表达,只在15℃有微量可溶表达。酶活性分析表明,28℃表达的重组酶包涵体酶活性性为0.7 U/mg。结论初步证实了存在活性包涵体的观点。
- 李小灵贺婉红范立强程安阳王刚潘忠孝朱庆庆孟军
- 关键词：大肠杆菌
- 结核分枝杆菌RipB基因的克隆、表达及对藤黄微球菌生长的影响
- 2013年
- 提取肺结核分枝杆菌基因组DNA,PCR扩增RipB基因并将其连接到表达载体pET-21a上,重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞后,用IPTG诱导表达重组蛋白。SDSPAGE表明:重组RipB表达蛋白量约占菌体总蛋白量的40%,而其在37℃表达时主要为包涵体,在15℃表达时主要在可溶上清内;Ni柱一步亲和层析获得重组RipB;100pmol/L重组RipB可显著促进藤黄微球菌生长。
- 王刚范立强程安阳李小灵潘忠孝孟军
- 关键词：结核分枝杆菌克隆表达生物活性
- 18型人乳头瘤病毒E6蛋白截短体（HPV18E6＊）的基因克隆与表达
- 2013年
- 目的构建HPV18 E6*原核重组表达质粒,并优化其蛋白表达条件。方法以人宫颈癌HeLa细胞cDNA为模版,PCR扩增HPV18 E6*基因,构建重组表达载体HPV18 E6*-pET28a,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达重组蛋白,并优化其表达条件,SDS-PAGE检测重组蛋白表达状况。结果成功构建了重组表达载体;37℃表达,HPV18 E6*以不溶包涵体为主,表达量占菌体总蛋白的20%左右;15℃主要为可溶形式;包涵体变复性获得纯蛋白。结论 HPV18 E6*蛋白的高效表达为研究其蛋白作用机制及为研究预防和治疗子宫癌奠定基础。
- 李小灵范立强
- 关键词：人乳头瘤病毒大肠杆菌
- 重组人SOD2/3杂合酶的制备及其生物活性初探被引量：1
- 2011年
- 为获得重组SOD2/3杂合酶,以及观察SOD2/3能否转导入宫颈癌细胞,抑制肿瘤细胞的增殖,构建了原核表达载体pET-SOD2/3,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达获得N端带有6个组氨酸标签的SOD2/3杂合酶;用Ni柱金属螯合亲和层析纯化重组SOD2/3;利用肝素柱层析验证SOD2/3的肝素靶向性;将纯化后的融合蛋白加入体外培养的宫颈癌细胞,通过FITC和MTT实验观察杂合酶SOD2/3的转导能力及其在细胞内的活性。成功构建了SOD2/3杂合酶的表达载体,重组SOD2/3表达量占菌体总蛋白30%左右;金属螯合亲和层析一步纯化,回收率在70%以上,纯度达90%左右;重组酶能与肝素亲和层析结合,说明杂合酶SOD2/3有肝素靶向性;细胞实验证实SOD2/3较SOD2能更好地抑制Hela细胞生长。获得了较纯的重组SOD2/3杂合酶,该酶能直接以天然有活性的形式转导人宫颈癌细胞内并抑制其细胞增殖,具有很好的作为肿瘤治疗、抗氧化损伤药物的潜力。
- 程安阳范立强赵健李小灵王刚
- 关键词：纯化抗肿瘤
- 18型人乳头瘤病毒E6蛋白截短体（HPV18 E6*）的基因克隆、表达及抑癌作用研究
- 高危型人乳头瘤病毒(Human Papillomavirus,HPV)与肿瘤的启动、发生、发展及恶性表型的全过程都密切相关,是与人类肿瘤关系最为密切的肿瘤病毒。E6及E7蛋白是HPV的主要转化蛋白。E6蛋白通过与p53结...
- 李小灵
- 关键词：人乳头瘤病毒
- 文献传递
