孙一帆
- 作品数：4 被引量：3H指数：1
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 应用酵母双杂交技术筛选HERG钾通道相互作用蛋白被引量：2
- 2012年
- 目的筛选心肌细胞内哪些蛋白质与HERG钾通道存在相互作用。方法 (1)通过PCR方法扩增编码心脏herg基因N端的cDNA片段(HERG-NT,aa 1-403)和C端的cDNA片段(HERG-CT,aa 669-1159),分别克隆进入pGBKT7载体,构建pGBKT7-herg-NT和pGBKT7-herg-CT诱饵质粒;(2)将被诱饵质粒转化的AH109分别涂布于SD/-Trp、SD/-Trp/-His、SD/-Trp/-Ade和SD/-Trp/X-α-Gal平板上,以观察诱饵蛋白是否自我激活报告基因;(3)将已被诱饵质粒转化的AH109分别与预转染于Y187的人类心脏cDNA文库进行酵母双杂交,分离阳性克隆中的cDNA,并测序。结果 (1)成功构建诱饵载体pGBKT7-herg-NT和pGBKT7-herg-CT,测序结果表明herg-NT和herg-CT都和"GAL4 DNA-BD-C-Myc"在同一读框,没有PCR引起的突变;(2)"诱饵"蛋白HERG-NT和HERG-CT均未能自我激化报告基因Ade2、Mel1和LacZ,弱激活报告基因His3,应用5mmol/L的3-AT可以有效抑制HERG-NT或HERG-CT所引起的组氨酸表达;(4)经过严格筛选后,发现Caveolin-1、FHL2和PTPN12等15种蛋白与HERG-NT存在相互作用,Myotrophin等8种蛋白与HERG-CT相互作用。结论成功应用酵母双杂交技术,以HERG钾通道蛋白的氨基端或羧基端为诱饵蛋白,筛选HERG钾通道的相互作用蛋白(Caveolin-1、FHL2、PTPN12、Myotrophin等),这些蛋白质可能与HERG存在相互作用。
- 孙一帆郑芳芳余宏马青艳林吉进
- 关键词：HERG钾通道蛋白质-蛋白质相互作用
- 心肌肥厚大鼠FHL2的表达水平变化研究被引量：1
- 2018年
- 目的研究大鼠心肌肥厚时FHL2表达水平的变化,探讨FHL2对心肌肥厚调控的作用。方法将雄性SD大鼠20只,随机分成腹主动脉缩窄组(AAC组)和假手术组(Sham组),每组10只,AAC组通过U型银夹缩窄腹主动脉的方法建立左室心肌肥厚模型,Sham组进行相同的手术步骤但未缩窄腹主动脉;术后6周,经胸心脏彩超测定心脏形态和心功能后以颈椎脱臼法处死,分离大鼠心脏记录形态学参数并通过HE染色和Masson染色观察心脏形态和纤维化程度;提取所有心肌组织总蛋白和总RNA,采用Western blot技术、实时定量PCR技术分析FHL2在两组大鼠心肌组织中的蛋白和mRNA表达水平。结果术后6周,心脏超声结果显示ACC组心肌较Sham组明显肥厚(P<0.05);与Sham组相比,AAC组大鼠心肌组织明显增厚,差异有统计学意义(P<0.05);ACC组FHL2蛋白和mRNA水平均明显较Sham组升高,差异有统计学意义(P<0.01)。结论心肌肥厚时FHL2表达水平明显上调;FHL2可能在心肌肥厚的发生发展过程中发挥重要调节作用。
- 符镇洋孙一帆姜成黄蕾林吉进
- 关键词：FHL2心肌肥厚蛋白表达腹主动脉缩窄
- 酪氨酸的磷酸化及去磷酸化对心脏钾离子通道的调控
- 2011年
- 心脏钾离子通道是人体内广泛存在的、种类最多、作用最复杂的一类离子通道,并在人类心肌细胞动作电位的各个时程中发挥着重要的作用。近年来由于新兴技术如膜片钳技术、基因突变技术、分子克隆技术等诸多技术的运用和发展,人们对钾离子通道的基因表达、分子结构、生理病理作用及调控机制等方面都有了很深的认识,然而对蛋白磷酸化与去磷酸化对心脏钾离子通道的调控尤其是酪氨酸磷酸化和去磷酸化调控方面的研究却比较少,为此做一简单综述。
- 郑方芳孙一帆林吉进
- 关键词：钾离子通道HERG钾通道酪氨酸磷酸化去磷酸化
- 应用酵母双杂交技术筛选HERG钾通道相互作用蛋白
- 目的:筛选心肌细胞内哪些蛋白质与HERG钾通道存在相互作用。方法:(1)通过PCR方法扩增编码心脏herg基因N端的cDNA片段(herg-NT,编码第1～403位氨基酸)和C端的cDNA片段(herg-CT,编码第66...
- 孙一帆郑芳芳余宏马青艳林吉进
- 关键词：钾通道酵母双杂交技术相互作用蛋白
