郑芳芳
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
- 供职机构：广东省人民医院广东省心血管病研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 应用酵母双杂交技术筛选HERG钾通道相互作用蛋白被引量：2
- 2012年
- 目的筛选心肌细胞内哪些蛋白质与HERG钾通道存在相互作用。方法 (1)通过PCR方法扩增编码心脏herg基因N端的cDNA片段(HERG-NT,aa 1-403)和C端的cDNA片段(HERG-CT,aa 669-1159),分别克隆进入pGBKT7载体,构建pGBKT7-herg-NT和pGBKT7-herg-CT诱饵质粒;(2)将被诱饵质粒转化的AH109分别涂布于SD/-Trp、SD/-Trp/-His、SD/-Trp/-Ade和SD/-Trp/X-α-Gal平板上,以观察诱饵蛋白是否自我激活报告基因;(3)将已被诱饵质粒转化的AH109分别与预转染于Y187的人类心脏cDNA文库进行酵母双杂交,分离阳性克隆中的cDNA,并测序。结果 (1)成功构建诱饵载体pGBKT7-herg-NT和pGBKT7-herg-CT,测序结果表明herg-NT和herg-CT都和"GAL4 DNA-BD-C-Myc"在同一读框,没有PCR引起的突变;(2)"诱饵"蛋白HERG-NT和HERG-CT均未能自我激化报告基因Ade2、Mel1和LacZ,弱激活报告基因His3,应用5mmol/L的3-AT可以有效抑制HERG-NT或HERG-CT所引起的组氨酸表达;(4)经过严格筛选后,发现Caveolin-1、FHL2和PTPN12等15种蛋白与HERG-NT存在相互作用,Myotrophin等8种蛋白与HERG-CT相互作用。结论成功应用酵母双杂交技术,以HERG钾通道蛋白的氨基端或羧基端为诱饵蛋白,筛选HERG钾通道的相互作用蛋白(Caveolin-1、FHL2、PTPN12、Myotrophin等),这些蛋白质可能与HERG存在相互作用。
- 孙一帆郑芳芳余宏马青艳林吉进
- 关键词：HERG钾通道蛋白质-蛋白质相互作用
- 应用酵母双杂交技术筛选HERG钾通道相互作用蛋白
- 目的:筛选心肌细胞内哪些蛋白质与HERG钾通道存在相互作用。方法:(1)通过PCR方法扩增编码心脏herg基因N端的cDNA片段(herg-NT,编码第1～403位氨基酸)和C端的cDNA片段(herg-CT,编码第66...
- 孙一帆郑芳芳余宏马青艳林吉进
- 关键词：钾通道酵母双杂交技术相互作用蛋白
