代长海
- 作品数：13 被引量：39H指数：4
- 供职机构：长春生物制品研究所更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学化学工程农业科学更多>>
- 应用生物反应器建立人用冻干狂犬病疫苗(Vero细胞)生产工艺的研究
- 目的：应用5L生物反应器，采用片状载体对Vero细胞进行高密度培养制备高毒力滴度的狂犬病毒收获液，经纯化后生产人用冻干狂犬病疫苗。
方法：采用5L生物反应器对培养方法(批次培养和连续灌流培养)进行试验，收获高毒...
- 李志强袁延宝郑淑媛代长海张夫坤顾丹阳戚凤春
- 关键词：狂犬病生物反应器冻干疫苗生产工艺
- 文献传递
- CpG对狂犬病疫苗免疫效果的影响被引量：5
- 2004年
- 目的 研究寡脱氧核苷酸 (简称CpG)对狂犬病疫苗免疫效果的影响。方法 用狂犬病疫苗原液 +Al(OH) 3 、狂犬病疫苗原液 +CpG、狂犬病疫苗原液 +Al(OH) 3 +CpG 3种配伍方式分别免疫地鼠 ,同时用狂犬病疫苗原液作对照 ;免疫途径分为腹腔、皮下和肌肉 ,全程免疫结束后 2周采血 ,进行小白鼠中和试验。同时用NIH法对不同配伍的疫苗进行效力检测。结果 3种免疫途径以皮下和肌肉免疫效果较腹腔为好 ;3种配伍方式中以狂犬病疫苗原液 +Al(OH) 3+CpG的免疫效果最好 ;狂犬病疫苗原液 +CpG较狂犬病疫苗原液对照免疫效果好。
- 李宇辉袁彦宝李淑兰张莹代长海胡晓明于洪涛
- 关键词：CPG狂犬病疫苗免疫效果寡脱氧核苷酸佐剂免疫途径
- 发酵温度对重组工程菌生长密度和干扰素表达的影响被引量：4
- 2002年
- 目的 观察发酵温度对重组人干扰素α2a。（IFNα2a）工程菌PBV888/DH5α。生长密度和表达的影响。方法 采用NBS－40L发酵罐，在发酵过程中调整培养温度，检测工程菌的生长密度和IFN表达量。结果 经35℃培养至对数期，降温至30℃继续培养2－3h后升温至42℃进行诱导培养，连续实验3批次，平均生长密度A值为35．0，菌体湿重47g/L，IFN表达量为28×106IU/ml。结论 确立了工程菌生长和IFN表达的最适培养温度。
- 王树君郭德本陈维佳代长海
- 关键词：发酵温度基因工程菌干扰素
- 破伤风类毒素对甲型副伤寒脱毒脂多糖的免疫增强作用
- 2011年
- 目的增强多糖抗原在婴幼儿中的免疫原性,提供有效的免疫保护。方法采用液体培养,收集菌体,脂多糖(LPS)提取,纯化脂多糖,活化脱毒多糖(O-SP)与破伤风类毒素(TT)共价结合。ELISA法检测O-SP及结合物的免疫效果。结果单纯甲型副伤寒脱毒脂多糖未能诱导小鼠产生抗体,而与TT结合后,具有良好的免疫原性,能产生体液免疫反应,诱导小鼠产生较高水平的抗脂多糖抗体和抗破伤风抗体。结论破伤风类毒类对甲型副伤寒脱毒脂多糖具有免疫增强作用。
- 代长海柏丛黄菲魏春红吴梅
- 关键词：破伤风类毒素免疫原性
- 白介素-2佐剂狂犬病疫苗的免疫学效果被引量：3
- 2007年
- 目的研究白介素-2佐剂狂犬病疫苗的免疫学效果。方法将人用纯化Vero细胞狂犬病疫苗原液与基因工程白介素-2按一定比例混合,制成白介素-2佐剂狂犬病疫苗,另将疫苗原液加氢氧化铝,制成铝佐剂狂犬病疫苗。将白介素-2佐剂疫苗、氢氧化铝佐剂疫苗和无佐剂疫苗分别于0、7d经腹腔免疫昆明小鼠,0.5ml/只,并在免疫前和免疫后4、6、10、17、2、31、45和59d,眶静脉采血,用快速免疫荧光灶抑制试验检测小鼠血清中和抗体。同时于0、7d经腹腔免疫BALB/c小鼠,0.5ml/只,第15天取脾检测淋巴细胞转化率。结果白介素-2佐剂疫苗与氢氧化铝佐剂疫苗和无佐剂疫苗淋巴细胞转化率差异均有显著意义。与铝佐剂疫苗和无佐剂疫苗相比,白介素-2佐剂疫苗诱导产生中和抗体的时间早,抗体滴度高。结论白介素-2佐剂狂犬病疫苗具有良好的免疫学效果。
- 袁彦宝郭岩代长海李宇辉张莹李光谱胡晓明于洪涛
- 关键词：狂犬病白介素-2佐剂免疫学效果
- 应用改良马丁培养基检测支原体的敏感性
- 1991年
- 支原体的潜在污染已成为疫苗生产和各种细胞培养工作的严重问题。检测支原体的方法有:培养法,DNA 荧光染色法,间接免疫荧光染色法和同位素掺入法等。我们采用改良马丁培养基培养法,对40个样品进行了检测,结果如下。待检样品为:小牛血清8批,原代细胞10批,传代细胞14批,其它组织培养物8批。
- 林延彬杨秀文代长海
- 关键词：传代细胞荧光染色法半固体培养基潜在污染疫苗生产小牛血清
- 黄芪多糖对人用狂犬病疫苗免疫原性的影响被引量：6
- 2006年
- 目的研究黄芪多糖对狂犬病疫苗免疫应答的影响。方法将BALB/c小鼠和昆明小鼠各自随机分为2组,即试验组与对照组,分别于0、7d接种冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)。对照组疫苗用灭菌注射用水稀释,试验组疫苗用10%黄芪多糖(APS)溶液稀释,每只腹腔免疫0·5ml。BALB/c小鼠于15d无菌取脾,进行淋巴细胞转化实验;昆明小鼠在免疫前和第1针免疫后4、7、14、30、45和60d眶静脉采血,分别进行外周血淋巴细胞CTL试验和小鼠中和抗体水平测定。结果试验组疫苗诱导小鼠产生的中和抗体和细胞免疫水平均高于对照组疫苗,二者差异有显著意义。结论黄芪多糖能提高狂犬病疫苗的免疫原性。
- 崔颖杰吴晓娟郭岩袁延宝代长海鲁文艳于洪涛
- 关键词：黄芪多糖狂犬病疫苗免疫原性
- 应用生物反应器建立人用冻干狂犬病疫苗(Vero细胞)生产工艺的研究被引量：6
- 2010年
- 应用15L生物反应器,采用片状载体对Vero细胞进行高密度培养、制备高毒力滴度的狂犬病毒收获液,经纯化后生产人用冻干狂犬病疫苗。采用15L生物反应器对培养方法(批次培养和连续灌流培养)进行试验,收获高毒力滴度的狂犬病毒收获液并制备人用冻干狂犬病疫苗。结果表明:Vero细胞在接种狂犬病毒后可以连续收获病毒液达到25d以上,冻干狂犬病疫苗的效价可以达到5.54IU/剂。本工艺可以用于进行大规模的人用冻干狂犬疫苗的生产。
- 李志强袁延宝郑淑媛代长海张夫坤顾丹阳戚凤春
- 关键词：生物反应器
- 狂犬病毒糖蛋白DNA疫苗的构建及免疫效果的研究
- 2005年
- 目的构建狂犬病毒糖蛋白基因DNA疫苗,并检测其免疫小鼠的免疫应答。方法用RT-PCR法扩增和分离CTN株狂犬病毒糖蛋白基因,测序后克隆入VR1055载体中,构建重组质粒VR1055-CTN,经碱裂解法提取质粒,并经Sepharose4FF柱层析纯化后免疫NIH小鼠,用ELISA法检测体液抗体,用MTT法检细胞免疫,并进行常规效力试验。结果VR1055-CTNDNA疫苗具有较好的诱导狂犬病毒抗体的能力,在诱导细胞免疫中,刺激脾淋巴细胞转化指数和小鼠血清中的IL-2活性均高于空白载体对照,差异有显著意义(P=0.000)。效力试验的小鼠存活率分别为73%和25%。结论该疫苗既能诱导体液免疫,又能诱导细胞免疫,并具有较好的免疫保护效果。
- 代长海李宇辉袁彦宝郭岩周明岩张莹胡晓明王进于洪涛
- 关键词：DNA疫苗狂犬病毒免疫效果病毒糖蛋白SEPHAROSE
- 狂犬病毒融合糖蛋白DNA疫苗及免疫效果的研究被引量：2
- 2005年
- 目的:构建含两种狂犬病毒疫苗株的融合糖蛋白基因DNA疫苗并对小鼠的免疫效果进行评价.方法:用RT-PCR法分别扩增和分离出SRV9株和CTN株的狂犬病毒糖蛋白部分表位的基因(SRV9毒株的1～252氨基酸和CTN毒株253～524氨基酸),构建含融合G蛋白基因的DNA疫苗质粒VR1055-SRV9CTN.碱裂解法大量提取重组质粒并经Sepharose 4FF柱层析纯化后直接肌肉注射免疫NIH小鼠,用ELISA法和淋巴细胞转化实验分别检测质粒DNA疫苗诱导小鼠产生抗狂犬病毒的体液免疫和细胞免疫效果.CTLL-2依赖细胞株/MTT比色法进行IL-2活性测定.结果:VR1055-SRV9CTN DNA疫苗具有较好的诱生狂犬病毒抗体能力.诱导细胞免疫方面,质粒VR1055-SRV9CTN DNA疫苗和空载体对照组的ConA刺激指数存在显著性差异(t=7.201,P=0.000).小鼠血清中的IL-2活性测定表明DNA疫苗组显著高于空载体组(t=21.616,P=0.000).CVS株RV脑内攻击保护实验中,疫苗组和对照组小鼠存活率分别为63%、25%,二者间差异具有显著性(t=7.065,P=0.008).结论:含狂犬病毒糖蛋白基因VR1055-SRV9CTN DNA疫苗既能诱导体液免疫又能诱导细胞免疫,具有较好的免疫保护效果.
- 李宇辉谷丽萍崔颖杰代长海袁彦宝郭岩周明岩胡晓明王进于洪涛
- 关键词：狂犬病病毒糖蛋白DNA疫苗体液免疫
