仕瑶慧 作品数:8 被引量:16 H指数:3 供职机构: 广州军区广州总医院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 广东省医学科学技术研究基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 更多>>
单纯疱疹病毒Ⅱ型潜伏相关转录子基因真核表达载体的构建 本实验通过构建表达2.2kbLAT的真核表达载体pVAX-LAT,使其在SH-SY5Y神经细胞中瞬时表达,为后续在HSV-2低滴度情况下,模拟人体内神经节中LAT的大量表达,抗神经细胞凋亡的实验,提供了实验基础。
... 仕瑶慧关键词:转录子 全长基因 抗神经细胞凋亡 瞬时转染 双酶切 文献传递 Hsp70-HSV-2gD融合蛋白疫苗阳离子脂质体的制备 被引量:3 2006年 目的:用不同的方法制备Hsp70-HSV-2gD融合蛋白疫苗阳离子脂质体,探索Hsp70-HSV-2gD融合蛋白疫苗可行的应用途径。方法:采用冻融法、逆相蒸发法、钙融合法分别制备Hsp70-HSV-2gD融合蛋白疫苗阳离子脂质体,在透射电镜下观察脂质体颗粒的大小,应用紫外分光光度计检测蛋白疫苗的包封率,并用ELISA法对Hsp70-HSV-2gD抗原活性进行测定。结果:逆相蒸发法制备的Hsp70-HSV-2gD融合蛋白疫苗阳离子脂质体包封率最大,达到(53±2.0)%,所制备的脂质体粒圆形,直径大小较一致,约600 nm,具有抗原活性。结论:成功制备了Hsp70-HSV-2gD融合蛋白疫苗阳离子脂质体,逆相蒸发法为制备Hsp70-HSV-2gD融合蛋白疫苗阳离子脂质体的最好方法。 樊建勇 杨慧兰 王捷 关蕾 王颖 成桂明 仕瑶慧关键词:单纯疱疹病毒 阳离子脂质体 蛋白疫苗 pVAX-Hsp70-HSV2gD DNA疫苗阳离子脂质体的制备 被引量:1 2006年 目的 制备pVAX-Hsp70-HSV2gD DNA疫苗阳离子脂质体,为基因免疫和基因治疗寻找一种简单、经济、有效的DNA投递系统。方法 采用逆向蒸发法,用卵磷脂、胆固醇、十八胺制备成阳离子脂质体包封pVAX-Hsp70-HSV2gD DNA疫苗,在透射电镜下观察脂质体颗粒的大小,应用紫外分光光度计检测DNA疫苗的包封率,免疫组化检测其转染真核细胞的效果。结果 制备的脂质体呈圆形、粒径大小较一致,平均粒径为580nm,DNA疫苗脂质体包封率达到50%~55%,能有效转染真核细胞。结论 成功制备了pVAX-Hsp70-HSV2gD DNA疫苗阳离子脂质体。该方法作为提高基因免疫效果的简单、经济、有效的手段之一,为其进一步的研究打下了基础。 樊建勇 杨慧兰 关蕾 王颖 仕瑶慧关键词:单纯疱疹病毒 阳离子脂质体 包封率 DNA疫苗 热休克蛋白70-Ⅱ型单纯疱疹病毒糖蛋白DDNA疫苗的构建及表达 被引量:7 2007年 目的:针对Ⅱ型单纯疱疹病毒(HSV-2)包膜糖蛋白D(gD),以热休克蛋白70(Hsp70)为载体,构建pVAX-Hsp70-HSV2gD DNA疫苗。方法:将Hsp70和HSV-2gD蛋白的基因分别克隆至真核表达载体pVAX,构建成重组质粒pVAX-Hsp70-gD并测序鉴定。重组质粒pVAX-Hsp70-gD转染COS-7细胞,用免疫组化、SDS-PAGE和W est-ern b lotting方法鉴定重组质粒的表达情况。结果:测序证实重组质粒序列正确,表达产物的SDS-PAGE分析发现,在相对分子量为92 000处有外源蛋白表达,与预期蛋白带一致。免疫组化方法和W estern b lotting也证明,构建的重组质粒能在COS-7细胞内表达。pVAX-Hsp70-HSV2gD组核酸疫苗免疫的小鼠,其脾淋巴细胞培养上清中γ-干扰素的水平高于其他组(P<0.05)。结论:成功构建了pVAX-Hsp70-HSV2gD DNA疫苗,为其进一步的研究打下了基础。 樊建勇 杨慧兰 关蕾 王颖 仕瑶慧关键词:热休克蛋白70 糖蛋白D 单纯疱疹病毒 DNA疫苗 潜伏相关转录体在单纯疱疹病毒中的作用 被引量:5 2006年 潜伏相关转录体是单纯疱疹病毒潜伏期间大量存在和被转录的RNA,也是目前研究单纯疱疹病毒潜伏-复发机制的热点。通过近30年的研究,对潜伏相关转录体在单纯疱疹病毒潜伏-复发中所起的作用有了更进一步的认识,但对其作用机制了解甚少。在这一未知领域,不断有新的假说提出,但其科学性有待进一步考证。为此,总结近年来对单纯疱疹病毒潜伏相关转录体作用机制的研究成果,为开展相关研究提供理论基础。 仕瑶慧 樊建勇 杨慧兰关键词:单纯疱疹病毒属 单纯疱疹病毒2 gD蛋白T细胞表位区的预测及克隆 2007年 目的预测并克隆单纯疱疹病毒2 gD蛋白T细胞抗原表位集中区。方法根据相关计算机软件和互联网服务器进行表位预测;提取单纯疱疹病毒2基因组,用特异性引物扩增预测的gD蛋白T细胞抗原表位集中区基因,酶切后将目的基因插入载体pGEX-4T-1,对重组载体酶切及测序鉴定。结果预测得到了单纯疱疹病毒2gD蛋白T细胞抗原表位集中区,构建成功重组载体pGEX-gD,经测序确认序列正确。结论单纯疱疹病毒2 gD蛋白T细胞表位集中区的成功预测及克隆可为今后单纯疱疹病毒疫苗的研究打下基础。 樊建勇 杨慧兰 关蕾 王颖 仕瑶慧关键词:单纯疱疹病毒 表位 Ⅱ型单纯疱疹病毒的潜伏相关转录体 2007年 仕瑶慧 杨慧兰 樊建勇关键词:潜伏期 转录体 RNAS HSV LAT及其在潜伏-感染中的作用 潜伏相关转录子LAT(Latency-associated transcript)是单纯疱疹病毒(HSV)在潜伏期间唯一大量存在和被转录的RNA,被认为在HSV潜伏的建立、维持和在再激活过程中起重要的作用.本文简介了HS... 杨慧兰 仕瑶慧关键词:单纯疱疹病毒 文献传递