赵威
- 作品数：5 被引量：18H指数：2
- 供职机构：北京大学临床肿瘤学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金北京市自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 利用规律间隔成簇短回文重复序列/相关蛋白9系统敲减α2δ1对人肝癌细胞系Hep-12干性的影响
- 2020年
- 目的通过规律间隔成簇短回文重复序列/相关蛋白9(CRISPR/Cas9)系统敲减人肝癌细胞系Hep12中电压依赖性钙离子通道α2δ1的表达,观察α2δ1敲减后对肝癌细胞干性的影响。方法设计3对靶向α2δ1的向导(sgRNA),长度为20 bp,构建到lenti CRISPRv2-puro载体上,然后在体外检测sgRNA切割活性,利用慢病毒包装系统包装含有sgRNA的重组质粒,将包装好的病毒感染Hep-12细胞,2 d后加入嘌呤霉素筛选。利用Western blotting验证α2δ1的敲减效果和干性相关基因的表达。通过成球实验检测其体外自我更新能力的变化。结果测序结果显示,sgRNA成功插入载体质粒;体外切割实验显示,3条sgRNA均有切割活性;Western blotting结果显示,α2δ1基因的表达显著降低,干性相关基因B细胞特异性莫洛尼白血病病毒插入位点1(BMI1)和Nanog的表达显著被抑制;无血清培养基成球实验结果表明,敲减α2δ1导致Hep-12细胞的体外自我更新能力减弱。结论利用CRISPR/Cas9技术成功构建敲除α2δ1基因的Hep-12细胞系;敲除α2δ1基因后能抑制Hep-12细胞肿瘤干细胞样特性。
- 何琦赵威张志谦
- 关键词：肝癌干细胞免疫印迹法
- 检测妇女尿中MMP2、MMP9、及MMP9-NGAL的表达对筛查早期乳腺癌病人的临床意义
- ＜正＞目的：探讨妇女尿中 MMP-2、MMP-9及 MMP-9/NGAL 复合物的表达,对乳腺癌高危发病的妇女是否具有普查筛选意义。方法：采用明胶酶底物电泳法、Western blot 方法,检测正常女性（n=60）、乳...
- 申哲洙顾晋赵威张志谦
- 文献传递
- 色素上皮衍生因子基因的克隆以及与肺癌细胞生长和肿瘤新生血管形成影响的研究被引量：6
- 2009年
- 目的克隆并在肺癌细胞SKMES1中表达色素上皮衍生因子（PEDF）蛋白；在体实验中观察PEDF蛋白过表达后对肺癌细胞生长和肿瘤相关性新生血管形成的影响。方法通过PCR技术扩增出可以表达PEDF蛋白的全长基因；利用基因重组技术与pEF6／v5-His质粒连接后构建出PEDF基因过表达载体PEDF^exp；将PEDF^exp载体转染SKMES1肺癌细胞，建立稳定过表达PEDF蛋白的肺癌细胞株；将过表达PEDF蛋白的肺癌细胞接种于鸡胚，在体实验中明确PEDF蛋白过表达后对肺癌细胞生长和肿瘤新生血管形成的影响。结果从人体组织的cDNA中成功扩增出PEDF全长序列，并正确构建了可以表达PEDF蛋白的载体，基因测序证实所构建的质粒载体中正确连接了没有核苷酸突变的目的片段；RT—PCR和Western印迹实验在RNA和蛋白水平证实，稳定转染PEDF^exp质粒的肺癌细胞与对照组肺癌细胞相比可以过表达PEDF蛋白。鸡胚实验证实PEDF基因过表达后，SKMES1^PEDFexp肺癌细胞形成病灶的体积明显小于对照组[（0．10±O．05）cm^3vs（0．17±0．07）cm^3]（P=0．016）；SKMES1^PEDFexp肺癌细胞形成病灶的质量也明显小于对照组细胞[（0．008±0．004）mgvs（0．024±0．009）mg]（P=0．006）。肿瘤相关新生血管计数结果显示，PEDF基因的过表达后，肿瘤病灶中一级血管的数量明显少于对照组细胞（15±3vs41±9）（P〈0．001）；二级血管的数量也明显少于对照组细胞（75±22vs175±39）（P=0．001）。结论成功构建出含有PEDF基因表达载体，为研究PEDF基因在肺癌中的功能奠定了基础。PEDF蛋白在肺癌生长以及肿瘤血管形成过程中的抑制作用说明PEDF蛋白是一种非常有前途的具有肺癌治疗作用的生物药物。
- 陈晋峰赵威张建芝Wen G Jiang张力建
- 关键词：色素上皮新生血管化病理性
- 基质金属蛋白酶-2C端片段PEX的原核表达及其对血管发生的抑制作用被引量：12
- 2002年
- 为了克隆表达鸡的基质金属蛋白酶 2 (MMP 2 )的C端片段PEX ,并探讨其对血管发生的抑制作用 ,利用RT PCR从鸡胚成纤维细胞克隆MMP 2C端片段PEX ,构建原核表达载体pCal n PEX ;转化大肠杆菌BL2 1(DE3) pLys,异丙基β D 硫代半乳糖苷 (IPTG)诱导产生PEX融合蛋白 ,包涵体蛋白用盐酸胍法变性、复性 ;生长曲线观察PEX融合蛋白对人脐静脉血管内皮细胞增殖的影响 ;鸡胚绒毛尿囊膜血管发生实验研究其对血管发生的抑制作用 .结果表明融合蛋白CBP/PEX具有抑制人脐静脉血管内皮细胞的生长和鸡胚绒毛尿囊膜血管发生的作用 .提示PEX是有待进一步开发的潜在抑制血管发生的药物 .
- 李金萍张光谋柯杨林本耀赵威胡颖宁涛林仲翔张志谦
- 关键词：MMP-2血管发生基质金属蛋白酶-2原核表达
- 间隙连接蛋白CX43抑制肺癌细胞转移的机制研究
- 间隙连接编码基因连接蛋白(connexin,Cx)被认为在细胞生长调控、机体内平衡稳定和个体发育中起着重要作用。已有大量报道证明在肿瘤细胞中间接蛋白基因表达异常,转染该基因可抑制肿瘤体内外的生长。为进一步探讨间隙连接蛋白...
- 赵威张志谦
- 关键词：CX43MMP-2肺癌
- 文献传递
