邓子兵
- 作品数：4 被引量：1H指数：1
- 供职机构：兰州理工大学生命科学与工程学院更多>>
- 发文基金：甘肃省科技计划项目国家大学生创新性实验计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 拟南芥AFP4的克隆、原核表达和纯化及其与ABI5的互作
- 2018年
- 拟南芥ABI5相互作用蛋白AFP4(ABI five binding protein 4)是植物中的一个小分子蛋白,其表达特性与ABI5相似,受ABA诱导。以拟南芥Arabidopsis thaliana L.(Heyn)cv.Columbia为材料,通过PCR扩增了AFP4基因的完整编码序列。扩增片段插入到原核表达载体pET-32a(+)的多克隆位点Eco RⅠ和XhoⅠ酶切位点之间和酵母双杂交载体pGBKT7的多克隆位点Eco RⅠ和PstⅠ酶切位点之间。将ABI5基因的编码序列插入到酵母双杂交载体pGADT7的多克隆位点Eco RⅠ和PstⅠ酶切位点之间。重组质粒测序结果表明,所克隆的AFP4和ABI5编码区序列分别与NCBI数据库收录的AFP4基因(Gen Bank登录号NM_111081.2)和ABI5基因(Gen Bank登录号NM_129185.3)完全一致。重组原核表达载体含有AFP4片段的重组融合蛋白的理论分子量为53.4 ku。将重组质粒转化至大肠埃希菌表达菌株BL21 Star(DE3)中诱导表达,并经Ni-NTA亲和层析柱分离纯化、SDS-PAGE分析和Western blot鉴定。将含有AFP4和ABI5的酵母双杂交重组质粒共同转化酿酒酵母AH109中进行酵母双杂交。结果表明,重组融合蛋白在大肠埃希菌E.coli BL21 Star(DE3)中表达的适宜条件为:IPTG浓度为0.4 mmol·L^(-1)、25℃下诱导表达6 h。在上述条件下,重组融合蛋白占细胞破碎后上清液总蛋白的41.6%。经Ni-NTA亲和层析柱纯化后,AFP4融合蛋白在SDS-PAGE分析时呈现单一条带。该条带经过抗6xHis标签肽的抗体分析,呈阳性。该条带经酵母双杂交分析结果表明,AFP4和ABI5在酵母细胞中可以相互作用。
- 邓子兵邱梁堃马建忠
- 关键词：拟南芥原核表达WESTERNBLOT酵母双杂交
- 草莓轻型黄边病毒外壳蛋白抗原表位预测、克隆、表达及其免疫原性分析被引量：1
- 2017年
- 应用IEDB、DNAStar、DNAMAN和Snap Gene等生物信息学工具对草莓轻型黄边病毒外壳蛋白的氨基酸残基序列进行分析。选择一段抗原性较强的肽段(位于外壳蛋白27~38氨基酸残基处),依据大肠杆菌(Escherichia coli)的密码子偏好性化学合成了该肽段的DNA编码序列(AE)。AE片段克隆至E.coli表达载体pET32a(+)的Eco RⅠ和XhoⅠ位点,获得重组质粒pET32a(+)-AE。含AE片段的开放阅读框长561 bp,编码了一个187氨基酸残基的重组融合蛋白,理论分子质量为20.29kD。重组质粒pET32a(+)-AE分别在E.coli BL21(DE3)和E.coli Rosetta中进行了诱导表达和条件优化。重组融合蛋白在E.coli Rosetta中的最佳表达条件为1.5 mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside,IPTG)、35℃诱导表达2 h,产率为13.22 mg/L;在E.coli BL21(DE3)中的最佳表达条件是为0.5 mmol/L IPTG、30℃诱导表达2 h,产率为9.55 mg/L。重组融合蛋白经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离、质谱鉴定表明,其含有所预测的草莓轻型黄边病毒外壳蛋白抗原表位肽段AE。AE重组融合蛋白经Ni^(2+)亲和色谱纯化、EK酶切、分子筛除去融合蛋白标签后,免疫产蛋鸡。从免疫鸡所产鸡蛋中提取鸡卵黄免疫球蛋白(immunoglobulin of yolk,Ig Y),Dot-Blot检测抗体结合活性。结果表明,所提取的IgY可特异性识别AE肽段和SMYEV外壳蛋白。这一结果表明所预测的AE肽段具有较好的免疫原性。
- 杨菊梅马建忠王永刚邓子兵魏艳潘博李印武
- 关键词：外壳蛋白抗原表位预测原核表达质谱鉴定免疫原性
- ABI5家族保守区Ⅱ的结构与功能研究
- ABI5及其亚家族成员是一类碱性亮氨酸拉链类转录因子,它们参与了脱落酸(ABA)介导的植物体对许多生物及非生物胁迫的应答。其家族中共有7个保守区,保守区Ⅱ在酵母细胞和植物细胞中均具有明显的转录激活活性。然而,存在于保守区...
- 邓子兵马建忠肖成斌马燕林
- 关键词：转录激活酵母单杂交
- 文献传递
- 草莓轻型黄边病毒外壳蛋白抗原表位预测
- 2016年
- 抗原表位是抗体识别并结合抗原的部位。抗原表位的预测有助于重组抗原的设计、快速筛选和高活性抗原的快速制备。通过DNAStar、Ex PASy、TMHMM Sever2.0和IEDB等软件对草莓轻型黄边病毒的外壳蛋白的二级结构、理化及生物学性质进行了分析。分析结果显示,草莓轻型黄边病毒的外壳蛋白中不存在跨膜区域;平均亲水性为-0.252,属于可溶性蛋白;潜在的抗原表位有5个,平均抗原指数为0.026 5~0.077 3。预测的上述5个抗原表位是否有抗原活性及其活性强弱仍有待于相应的试验论证。
- 邓子兵马建忠王永刚杨菊梅魏艳潘博李印武
- 关键词：外壳蛋白抗原表位
