杨泉生
- 作品数：3 被引量：3H指数：1
- 供职机构：第四军医大学西京医院更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 聚甲基丙烯酸甲酯颗粒诱导假体周围骨溶解的实验研究被引量：1
- 2007年
- 通过破骨细胞培养及动物模型,探讨颗粒诱导假体周围骨质溶解的机制。取SD仔鼠骨髓细胞,在聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)颗粒的刺激下,进行体外破骨细胞培养,然后行TRAP染色,观察颗粒对破骨细胞形态的影响;对骨片上形成的骨吸收陷窝行甲苯胺蓝染色观察并计数。选用24只BALB/c小鼠,在小鼠颅骨部位注入PMMA颗粒,建立骨吸收动物模型。按照注入颗粒的不同随机分为2组,即实验组和对照组,每组12只。2周后处死动物并取材,行HE染色、TRAP染色及TNF-α免疫组化检查。结果显示,PMMA颗粒在体外条件下实验组TRAP染色阳性细胞数及骨吸收陷窝数均较对照组多。动物模型结果显示实验组有明显的骨吸收现象,而对照未发现明显的骨吸收;免疫组化检测亦显示实验组TNF-α较对照组明显。说明PMMA颗粒可诱导假体周围骨质溶解,继而引发假体松动。
- 方庆朱庆生张大伟王华益杨泉生曹晓瑞
- 关键词：破骨细胞动物模型骨吸收
- GST-p60PLAD融合蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达和纯化被引量：1
- 2007年
- 目的:制备GST-p60PLAD融合蛋白.方法:依据人p60PLAD氨基酸序列,根据大肠杆菌偏爱密码子进行反翻译,获得适合在大肠杆菌中表达的基因序列.根据该基因序列设计五条引物,用重叠延伸PCR法获得编码人p60PLAD的基因,进而将其克隆入原核表达载体pGEX-4T-2中,转化大肠杆菌BLR(DE3)polys.经IPTG诱导表达后收集菌体,超声裂解,将上清液经GSTrapFF亲和层析柱纯化、经HiTrap脱盐柱脱盐,用SDS-PAGE进行分析.结果:成功构建重组质粒pGEX-4T-2-p60PLAD,经DNA测序证实插入序列与设计完全一致.并在大肠杆菌中高表达出Mr约为34×103大小具有可溶性的目的蛋白,经亲和层析柱纯化后获得纯度很高的GST-p60PLAD融合蛋白.结论:成功制备了高纯度的GST-p60PLAD融合蛋白,为进一步探讨p60PLAD蛋白的结构和生物学活性提供必要的物质基础.
- 曹晓瑞朱庆生张大伟李立文杨泉生
- 关键词：融合蛋白可溶表达纯化
- 透明质酸合成酶2真核表达载体的构建及表达被引量：1
- 2007年
- 构建了透明质酸合成酶2真核表达载体,并观察其在真核细胞中的表达。利用RT-PCR法从MG63细胞总RNA中扩增,获得人透明质酸合成酶2cDNA,并克隆至真核表达载体pEGFP-N3,将经双酶切鉴定和DNA测序证实的阳性重组子命名为pEGFP-N3-HAS2。脂质体法转染HEK293细胞,用倒置荧光显微镜检测、分析其在HEK293细胞表达及定位。双酶切鉴定和DNA测序证实成功构建pEGFP-N3-HAS2真核表达载体。转染HEK293细胞后可见HAS2-EGFP融合蛋白高表达并定位于浆膜。该载体的成功构建为进一步探讨透明质酸合成酶2在治疗骨性关节炎、修复关节软骨缺损中的应用价值奠定了基础。
- 杨泉生朱庆生李立文张大伟曹晓瑞李文献
- 关键词：透明质酸合成酶透明质酸EGFP
