李立文 作品数:67 被引量:165 H指数:8 供职机构: 西北大学 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 陕西省科技攻关计划 陕西省科学技术研究发展计划项目 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 农业科学 文化科学 更多>>
构建携带hTERT I540-PTD融合基因表达框的穿梭质粒 被引量:3 2005年 目的: 设计hTERTI540 PTD融合基因表达框并构建携带该表达框的穿梭质粒.方法: 根据hTERTI540表位、HIV 1TAT PTD和PTD4的氨基酸序列设计融合疫苗,然后根据哺乳动物偏爱密码子反翻译成基因序列.分段合成寡聚脱氧核糖核酸,磷酸化、退火后先后克隆至pSP72的BamHI EcoRI和XbaI BanHI之间.将经双酶切鉴定获得的阳性重组子进行基因测序.然后将hTERTI540 PTD融合基因表达框亚克隆至pDC315.结果: 测序结果表明hTERTI540 PTD和hTERTI540 PTD融合表达框的基因序列与设计完全一致.穿梭质粒pDC315 I540 PTD和pDC315 I540 PTD4经EcoRI酶切后均清晰可见 112bp电泳条带,与预测相符.结论: 成功获得了携带hTERTI540 PTD和hTERTI540 PTD4表达框的穿梭质粒pDC315 I540 PTD和pDC315 I540 PTD4,为制备以重组腺病毒为载体的I540 PTD基因疫苗、比较蛋白转导能力的强弱对基因疫苗免疫效能的影响奠定了基础. 郭晓彤 张积仁 刘文超 任军 李立文关键词:癌症疫苗 端粒酶逆转录酶 肿瘤 免疫疗法 BIG-3的原核表达、纯化及其多克隆抗体的制备与鉴定 被引量:1 2007年 原核表达、纯化骨形态发生蛋白诱导基因(BIG-3,BMP-2-induced gene 3kb)所编码的融合蛋白并制备其多克隆抗体。将BIG-3基因插入原核表达载体PGEX-4T-2的多克隆位点获得pGEX-4T-2-BIG-3重组表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株,诱导表达,SDS-PAGE鉴定融合蛋白表达情况及Sepharose4B层析柱亲和层析法纯化的融合蛋白;用纯化的融合蛋白免疫新西兰大白兔制备其多克隆抗体,并以Western blot鉴定其特异性。结果在大肠杆菌中获得BIG-3-GST融合蛋白高水平的诱导表达,经Sepharose4B层析柱亲和层析,GST-BIG-3融合蛋白在电泳图片上显示较为清晰的单一条带,所制备的多克隆抗体具有较高的特异性。说明在大肠杆菌中成功表达且以亲和层析法纯化得到了BIG-3-GST融合蛋白,并制备了特异性较高的多克隆抗体。 李丹 李立文 孟国林 毕龙 孙嘉荣 刘民 胡蕴玉关键词:骨形态发生蛋白质类 原核表达 融合蛋白质类 多克隆抗体 阻断一侧肺动脉血流对兔右心输出量的影响 为研究肺缺血及缺血后再灌注损伤,常需阻断一侧肺动脉。此时右心输出量将有何变化? 用日本大耳白兔16只,随机分为两组:①对照组(n=8)动物开胸后用 MFV-1200型电磁血流量计5mm 探头在肺动脉主干进行6h 右心输出... 贾松惠 李立文 孙志东 温光楠文献传递 HMGB1B盒编码序列的克隆和大肠杆菌表达 被引量:2 2005年 目的:克隆小鼠高迁移率族蛋白1(highmobility groupbox1,HMGB1)B盒编码序列并在大肠杆菌中表达GST B盒融合蛋白.方法:从新生小鼠肺组织提取总RNA,经RT PCR获得HMGB1B盒编码序列.将酶切后PCR产物克隆到 pGEX 4T 2载体的BamHI和EcoRI位点之间,经双酶切鉴定 后测序证实.用pGEX 4T 2 B转化BL21(DE3)感受态细胞,在30℃经IPTG诱导表达5h后进行SDS PAGE分析.结果: 测序结果证实成功获得了小鼠HMGB1B盒编码序列,其序列 与GenBank中报道序列完全一致.SDS PAGE分析表明,在大 肠杆菌BL21(DE3)中高效表达了GST B盒蛋白,表达量约占 菌体总蛋白的30%,结论:成功克隆小鼠HMGB1B盒编码序 列并在大肠杆菌中获得了高效表达. 姜南艳 于文彬 苏明权 李斌 郝晓柯 李立文关键词:高迁移率族蛋白1 基因表达 机械牵张应力刺激成骨细胞的差异蛋白质组学研究 被引量:9 2010年 目的应用蛋白质组学方法分析人成骨样细胞Saos-2在牵张应力作用下蛋白质表达的差异,为更全面地阐明成骨细胞对牵张应力的反应机制提供分子基础。方法将Saos-2分为加力组与对照组,采用Flexcell牵张应力加载系统,用12%大小的应力值进行力学刺激24 h后,应用蛋白质双向凝胶电泳分离蛋白样品,质谱技术鉴定差异表达蛋白点,并用生物信息学分析差异蛋白参与的生物学过程和主要功能。结果对照组和加力组分别得到(1031±41)和(928±25)个蛋白质点,质谱鉴定出肽酰脯氨酰异构酶A样3、线粒体ATP合成酶、抗氧化蛋白1、丝切蛋白1、蛋白磷酸酶1、延伸因子2等17个表达增高的差异蛋白质,涉及应激反应、能量代谢、细胞增殖、细胞骨架重建、信号转导及成骨分化等生物学功能。结论成骨细胞在机械牵张应力作用下蛋白表达发生显著变化,这些差异蛋白参与了成骨细胞力学反应机制的不同过程。 李菲菲 丁寅 冯雪 王欢 陈富林 李立文关键词:成骨细胞 蛋白质组学 信号转导 结核分枝杆菌Rv2389c基因的克隆和原核表达 被引量:2 2006年 目的:克隆并原核表达结核分枝杆菌Rv2389c基因。方法:培养结核分枝杆菌,提取其基因组,PCR扩增出485bp的Rv2389c基因,克隆入pSP73载体,测序分析。将该目的基因亚克隆入pGEX-4T-2表达载体,测序证实正确后转化大肠杆菌BL21(DE3),待大肠杆菌增菌至A600nm值为0.6时,用0.3 mmol/L IPTG在30℃诱导表达重组蛋白。结果:测序结果证实获得了Rv2389c基因,其序列与GenBank中报道完全一致。构建了重组表达质粒,表达的蛋白以12%SDS-PAGE分析,在Mr约42KD处出现一条新生蛋白带,经凝胶薄层扫描检测,表达量约占菌体蛋白的26.8%。结论:成功克隆了结核分枝杆菌Rv2389c基因并得到了其大肠杆菌表达产物,为进一步研究其活性和功能奠定了基础。 李立青 苏明权 李立文 郝晓柯关键词:结核分枝杆菌 克隆 吖啶橙荧光法检测泌尿生殖道分泌道中的沙眼衣原体 2003年 AIM: To explore the value and significance of detecting the chlamydia trachomatis(CT) from urogenital tract samples by the acridine orange fluorescence(AOF).METHODS: 110 samples from urogenital tract were detected by AOF.RESULTS: The total positive rate is 49.0%,in which the male are 53.0%(16/30) the female are 45.0%(38/80).CONCLUSION:AOF is combination of fluorescence method and morphologic. It showes the characteristics of easiness and fastness,and can be used in screening the infection of the Chlamydia trachomatis. 王强武 苏明权 李立文 李哲关键词:沙眼衣原体 分泌物 粒细胞巨噬细胞集落刺激因子与哮喘非特异性炎症 被引量:12 1994年 目前研究表明粒细胞巨噬细胞集落刺激因子在哮喘非特异性炎症局部的表达显著升高,并对嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞及肥大细胞等的生物学活性有较大的影响,从而加速非特异性炎症的发生和发展。 李立文关键词:非特异性炎症 哮喘 GM-CSF 利用RNA聚合酶Ⅲ依赖的启动子实现条件性RNA干扰 被引量:1 2005年 RNA干扰(RNA interference,RNAi)是指由双链RNA引发的同源mRNA特异性降解过程,目前已成为功能基因组学研究的有力工具,并广泛应用于肿瘤基因治疗研究领域。载体介导的RNAi是向细胞内引入小干扰RNA(small interference RNA)的经济、有效的方法,然而由于用来引导siRNA表达的U6、H1等RNA聚合酶Ⅲ依赖的启动子均没有可诱导性或组织特异性,所以在研究特定基因功能和在基因治疗中的应用均受到一定限制。最近研究表明使用顺式/反式转录调控元件对PolⅢ启动子进行修饰或通过Cre-LoxP系统控制PolⅢ启动子或shRNA的结构可实现可诱导性、组织特异性等条件性RNAi。这些方法的建立不仅拓宽了RNAi技术的应用范围,而且大大提高了基于RNAi技术的肿瘤基因治疗的安全性,具有良好的临床应用前景。 舒茂国 郭晓彤第四军医大学西京医院肿瘤科 郭树忠 王昕红 李立文关键词:RNA干扰 启动子 CRE重组酶 交配时间影响小鼠胚胎发育 本研究在前人研究基础上以KM小鼠为研究对象,从交配率,胚胎成功收集率和胚胎发育等方面综合评价交配时间对胚胎发育的影响,为以后研究提供了需要不同质量胚胎可以选择不同交配时间的方法。 严兴荣 钟方翼 郭建鑫 田静 陈富林 李立文 谢鑫 崔继红关键词:小鼠 超数排卵 交配 胚胎