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原核Argonaute的应用研究进展: 2024年; 原核生物Argonautes(pAgos)是参与细胞防御外来DNA入侵的可编程核酸酶。在体外,pAgos可以结合小的单链核酸(ssDNA/ssRNA)向导来识别和切割互补DNA/RNA。在体内,pAgos优先靶向多拷贝遗传元件、噬菌体和质粒,从而抑制入侵核酸的扩增和噬菌体感染。pAgos作为一类新兴的可编程核酸酶,比目前应用最为广泛的CRISPR-Cas系统更具灵活性,在生物技术方面展现出巨大的潜力。早期的研究聚焦于嗜热的pAgo,目前基于嗜热pAgos的主要应用包括分子诊断和体外DNA组装。为了推进基于Ago的体内生物技术,如基因编辑的应用,研究人员的焦点逐渐转移到中温生物来源的pAgos,虽然目前pAgos还未实现基因组编辑,但是随着越来越多的pAgo被发掘以及研究人员对pAgos催化机制的深入研究,有望开发基于pAgos的下一代基因编辑技术。本文总结了已知代表性pAgos和基于pAgos发展的生物技术,并简要分析了pAgos在原核生物和真核生物体内应用面临的挑战和可能的应对策略。; 王飞李文强刘洋王珑瑜陈晚苹崔佳凯马立新; 关键词：分子诊断

SIRT1的研究进展被引量：5: 2015年; 哺乳动物细胞SIRT1(Sirtuin1)是一种依赖于烟酰胺腺苷二核苷酸(NAD+)的去乙酰化酶,与酵母细胞中与物质代谢和长寿有关的沉默信息调节因子SIR2同源,具有对底物去乙酰化功能的基因。SIRT1通过使底物蛋白的去乙酰化而调控DNA的表达、细胞凋亡、衰老,参与生物体生理或病理过程。本文对SIRT1与寿命、癌症、新陈代谢紊乱等疾病的生物学机理和治疗方法的相关性进行综述。; 梅堃王飞张晨瑶左江余晓岚; 关键词：SIRT1 癌症新陈代谢信号分子 RNAS 表观遗传学

融合胸腺素α1的猪干扰素α在毕赤酵母中的表达及效价测定被引量：2: 2017年; 猪干扰素α(IFN-α)是在特定条件下由细胞产生的一种具有广谱、高效抗病毒活性的可溶性糖蛋白,胸腺素α1(Tα1)是一种具有免疫调节的活性肽.本研究中将Tα1基因与去掉信号肽序列的猪IFN-αN端融合,构建酵母表达载体PHBM-Tα1-IFNα,同时构建单独表达IFNα的重组质粒PHBM-IFNα,重组质粒电转化至毕赤酵母(Pichia pastoris)菌株,甲醛诱导表达.利用SDS-PAGE法检测融合蛋白的表达,并用细胞病变抑制法测定干扰素的效价.实验结果表明,酵母表达上清中IFNα的效价为2.916×10~6U/m L;Tα1-IFNα的效价为2.860×10~7U/m L,该结果证实胸腺素α1可提高融合表达蛋白猪干扰素的活性,因此,通过酵母表达体系获得高活性胸腺素-猪干扰素融合蛋白,可为高效、低成本获得抗病毒药物提供一种新的模式.; 刘敏张晨瑶王飞翟彦生肖颖马立新余晓岚; 关键词：干扰素毕赤酵母表达系统

利用分离型内含肽DnaE表达抗菌肽: 2017年; 拟验证天然断裂内含肽Npu Dna E、Ssp Dna E的反式剪接反应对嵌合蛋白形成的影响,探讨依据此方法表达抗菌肽的可行性,规避抗菌生物表达中对宿主的毒害作用.将花蝉属抗菌肽ADP-1(Amblyomma defensin peptide 1)拆分为N端和C端两部分,其N端与断裂型内含肽Npu Dna E的N端融合,C端与Ssp Dna E的C端融合,并分别构建到原核表达载体p ET-23a(Amp+)和p ET-30a(Kan+)上,获得重组表达质粒p ET-23a-ADP-1-N-Npu和p ET-30a-Ssp-ADP-1-C,然后单独或共转化大肠杆菌感受态细胞BL21.实验结果表明,两个重组质粒分别单独或组合转化至Bl21(DE3),经IPTG诱导后,SDS-PAGE检测转化的菌株中都表达了目的蛋白,共转化的菌株诱导表达破菌后其上清液有抑菌活性.该实验验证以两种天然断裂型内含肽Ssp Dna E和Npu Dna E及搭载的ADP-1 N端和C端可在大肠杆菌中获得表达,且共转化的两段内含肽可在离体上清中发生反式剪接,促进融合在内含肽上的ADP-1两部分形成完整具有抑菌活性产物.; 张晨瑶刘敏王飞孙斌马立新余晓岚; 关键词：抗菌肽 NPU DNA SSP DNA 反式剪接抑菌活性

抗KOD聚合酶单克隆抗体的制备(英文): 2010年; 单克隆抗体具有高度的均一性和专一性。抗KOD聚合酶单克隆抗体，可以特异性结合于KOD聚合酶，抑制PCR反应前常温状态下的多聚酶活性，显著提高PCR反应的特异性。为了提高KOD聚合酶PCR反应的特异性，以KOD聚合酶为抗原，制备了两株抗KOD聚合酶的单克隆抗体。以大肠杆菌表达的重组蛋白KOD聚合酶为抗原免疫BALB／c小鼠，然后将免疫小鼠的脾细胞与SP2／0骨髓瘤细胞融合，通过HAT选择培养、ELISA检测和有限稀释法克隆，建立了2株能稳定分泌抗KOD聚合酶单克隆抗体的杂交瘤细胞，分别命名为1F5与3G6，对应的抗体亚型分别是IgGl和IgG2a。染色体计数结果分别是85～90和83～86。1F5与3G6的细胞上清和腹水的ELISA效价分别为1：2^8，1：2^9和1：2^11，1：2^11。间接免疫荧光证实制备的单克隆抗体的特异性良好。该结果为进一步建立高特异性的PCR方法奠定了良好的基础。; 余晓岚李玉王飞钟星陈亮马立新; 关键词：单克隆抗体 ELISA检测

中学生物学课程思政建设案例的探索: 2022年; 随着生物学科的发展和高考改革,中学生物课程受到越来越多的重视。根据普通高中生物学课程标准(2017版,2020年修订),本文挖掘了几个思政理念与生物学课程融合的典型案例,展示如何通过中学生物课程来培养青少年的“生命观念、科学思维、科学探究和社会责任”等核心素养,希望为中学生物学教学与课程思政的结合提供一些参考意见。; 王飞孙凤翟超; 关键词：中学生物课程

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王飞