张红
- 作品数：2 被引量：4H指数：2
- 供职机构：中南大学湘雅医院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 包裹pcDNA3.1(-)/MAGE-3-HSP70壳聚糖纳米粒的制备及其特性被引量：2
- 2009年
- 背景:裸质粒DNA在基因治疗中因带负电荷,易被体内核酸酶降解,故无法实现有效转染,壳聚糖是自然界存在的可降解性阳离子多聚糖,能有效防止DNA被核酸酶降解,提高转染效率。目的:采用复凝聚法制备包裹pcDNA3.1(-)/MAGE-3-HSP70壳聚糖纳米粒,观察其相关特性。设计、时间及地点:对比观察实验,于2009-02/08在国家卫生部纳米生物技术重点实验室完成。材料:pcDNA3.1(-)/MAGE-3-HSP70由国家卫生部纳米生物技术重点实验室构建,壳聚糖(批号060306,脱乙酰度>90.0%,黏度<100mPa*s)由上海伯奥生物科技有限公司提供,B16细胞由中南大学肿瘤研究所惠赠。方法:采用复凝聚法制备包裹pcDNA3.1(-)/MAGE-3-HSP70壳聚糖纳米粒,将壳聚糖基因纳米粒转染B16细胞,利用反转录-聚合酶链反应检测体外转染效果;应用噻唑蓝评价壳聚糖基因纳米粒子的体外细胞毒性。主要观察指标:激光粒度仪测定壳聚糖基因纳米粒径、Zeta电位;紫外分光光度计检测包封率;凝胶阻滞实验观察壳聚糖和质粒DNA的聚合;DNaseⅠ的保护试验分析壳聚糖基因纳米粒抗核酸酶降解能力。结果:壳聚糖基因纳米粒的平均粒径约为223nm,Zeta电位为16mV;DNA包封率为92.3%,B16细胞转染实验显示其效率与Lipofectamine2000相近,而其毒性远低于Lipofectamine2000。结论:壳聚糖纳米粒子可高效装载质粒DNA转染B16细胞,而且对细胞基本无毒。
- 吴季霖张阳德李坚张红
- 关键词：纳米粒纳米生物材料基因载体
- 石墨碳纳米颗粒对体外培养细胞生长特性的影响被引量：2
- 2010年
- 背景:有报道指出石墨碳纳米颗粒具有强大的吸附能力,只要尽可能将其控制在有效浓度范围内,石墨碳纳米颗粒会具有很好的细胞相容性及增敏效应。目的:了解石墨碳纳米颗粒的形态特征,观察石墨碳纳米颗粒其对体外培养细胞增殖与超微结构的影响。方法:取石墨碳纳米颗粒0.5g,加100mL三蒸水,振荡后微孔过滤,即为石墨碳纳米颗粒母液。取处于对数生长期的HepG2细胞、L02细胞、Hl7702细胞、3T3细胞,调整密度为5×107L-1接种于6孔板,0.5mL/孔,加入含胎牛血清、青霉素、链霉素的RPMI-1640培养基1.5mL,培养24h后弃去旧液,设1～5号孔为实验组,分别加入质量浓度为25,10,7.5,5,0.25mg/L石墨碳纳米颗粒培养液2.0mL,设6号孔为空白对照组,不加石墨碳纳米颗粒溶液,继续培养24h后终止培养。用原子力显微镜测量石墨碳纳米颗粒的粒径,电子显微镜观察石墨碳纳米颗粒的形态特征;用细胞计数板在光学显微镜下计数不同浓度石墨碳纳米颗粒对细胞数量的影响;透射电镜观察7.5mg/L石墨碳纳米颗粒对细胞超微结构的影响。结果与结论:石墨碳纳米颗粒呈球形微粒,粒径约20nm。与空白对照组比较,各浓度石墨碳纳米颗粒培养液组除HepG2细胞外,其余3种细胞数量基本都有所增加,其中7.5mg/L石墨碳纳米颗粒培养液对L02细胞、Hl7702细胞、3T3细胞、HepG2细胞数量的影响最为显著(P<0.05)。对7.5mg/L石墨碳纳米颗粒作用后的细胞进行透射电镜观察,可见石墨碳纳米颗粒分布于细胞内部,如细胞质、细胞核、线粒体中,未见亚细胞结构受损及细胞凋亡坏死现象发生。证实石墨碳纳米颗粒对体外培养的细胞无损伤不良反应,且能够促进细胞生长增殖,其作用强度与质量浓度有关,7.5mg/L为较佳质量浓度。
- 刘东京张红张阳德刘美洲吴季霖潘一峰陈伟刘辉曾庆仁
- 关键词：人肝癌细胞株超微结构细胞生长
