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莱茵衣藻纤毛内运送蛋白IFT27的原核表达、纯化及多克隆抗体制备被引量：10: 2016年; [目的]制备莱茵衣藻纤毛内运送蛋白IFT27的多克隆抗体。[方法]利用莱茵衣藻ift27基因的cDNA序列构建了原核表达载体p ET28a-ift27和p MAL-C2X-ift27,转入大肠杆菌BL21(DE3)诱导表达,获得了6×His/MBPIFT27两种重组融合蛋白。将纯化后的MBP-IFT27融合蛋白免疫新西兰大白兔,5次后采集抗血清,间接ELISA法测定效价,并对抗血清依次经protein A和抗原抗体两步纯化后使用Western Blot和免疫荧光对抗体特异性进行检测。[结果]MBP/6×His-IFT27融合蛋白表达后分子量分别为27 k Da和67 k Da。ELISA测定其效价为1∶256 000,Western Blot检测可特异性识别莱茵衣藻中的IFT27蛋白,免疫荧光结果显示可检测到纤毛中的IFT27蛋白。[结论]制备出特异性抗莱茵衣藻IFT27的多克隆抗体,效价为1∶256 000,Western Blot可特异性检测到莱茵衣藻中IFT27蛋白的目的条带,免疫荧光可定位IFT27在细胞内分布。; 董彬吴松王晶孟德梅樊振川; 关键词：莱茵衣藻纤毛表达纯化多克隆抗体

改性乳酸菌微胶囊壁材的研究进展: 2016年; 乳酸菌微胶囊所用壁材主要为生物相容性良好的天然高分子材料。然而天然材料的结构种类有限,不能持续地提高微胶囊对乳酸菌活菌数量的保护作用。改性壁材可以根据用途对原有材料进行结构改造,在保持良好生物相容性的前提下,赋予壁材更好的保护功能。该文综述了国内外改性微胶囊壁材在乳酸菌微胶囊化方面的研究进展。; 刘媛孙也李淑雅王晶王艳萍; 关键词：微胶囊乳酸菌

莱茵衣藻作为绿色细胞工厂生产高附加值重组蛋白的研究进展被引量：3: 2017年; 重组蛋白广泛用于医疗、养殖、食品等领域.利用单细胞绿藻——莱茵衣藻为绿色细胞工厂生产重组蛋白的研究在很长时间以来便引起了广泛的关注.相对于传统细胞工厂,这种光合真核微生物在生产高附加值蛋白方面具有众多潜在优势,包括具备准确折叠和组装复杂蛋白的能力、规模化培养时间短、生物安全性高和生产成本低廉等.目前,利用莱茵衣藻叶绿体基因组和核基因组已成功表达了多种重组蛋白,如蛋白亚基疫苗、单链抗体、蛋白细胞因子、蛋白(肽)类激素和工业养殖业用酶等,初步证实了莱茵衣藻作为绿色细胞工厂方面的实用性.本文阐释了莱茵衣藻作为绿色细胞工厂生产高附加值重组蛋白的优势和目前已取得成就的典型案例,并对今后需要克服的困难进行了讨论.; 樊振川吕玉洁刘雁霞王晶董彬孟德梅; 关键词：莱茵衣藻重组蛋白

绿色荧光蛋白GFP多克隆抗体的制备及在多种细胞中的特异性鉴定被引量：5: 2017年; 绿色荧光蛋白是当前在生物及生物医学研究当中应用最为广泛的一种荧光标记蛋白.为开发一种高灵敏度、高特异性以及简单经济的GFP多克隆抗体,并使之适用于在跨物种细胞里表达的GFP蛋白进行检测,本文利用gfp基因cDNA全序列分别构建了带有6×His和GST标签的原核表达载体pET28A-gfp和p GEX-2T-gfp,并将其转入大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)细胞进行诱导表达,而后进行聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)表达鉴定,分别获得了相对分子质量为2.6×10~4和5.2×10~4的重组6×His/GST-GFP融合蛋白.将亲和纯化的6×His-GFP融合蛋白免疫新西兰大白兔,采集第5次免疫后血清用ELISA测定效价为1﹕32,000.抗血清依次经Protein A亲和纯化和GST-GFP抗原抗体纯化后,用免疫印迹实验(Western blot)方法检测抗体特异性,结果表明制备的多克隆抗体能很好地识别在莱茵衣藻(Chlamydomonas reinhardtii)、HEK293细胞和大肠杆菌中表达的GFP,对继续开展GFP相关研究具有重要意义.; 董彬胡贺贺王晶孟德梅樊振川; 关键词：原核表达蛋白纯化多克隆抗体免疫印迹

改性海藻酸钠微胶囊的制备及毒性研究被引量：1: 2016年; 以改性海藻酸钠(聚丙烯酸钠接枝海藻酸钠)作为新型的乳酸菌微胶囊壁材,研究改性海藻酸钠的毒性和对多种乳酸菌的包埋效果。结果显示,该材料对大鼠无急性毒性,且对组织细胞亦无明显毒性,可安全食用;与海藻酸钠相比,该材料制备的微胶囊结构更为紧致,有助于阻隔多种不利因素对乳酸菌活性的影响,同时提高了对植物乳杆菌MA2、嗜酸乳杆菌563和乳酸乳球菌WH-C1的包埋率(分别提高4.5%、4.4%和7.1%),降低了粒径(分别降低0.34 cm、0.26 cm和0.21 cm)。因此,该材料有望成为一种安全、有效的乳酸菌微胶囊壁材。; 刘媛孙也孙丽璠李淑雅王晶王艳萍; 关键词：聚丙烯酸钠海藻酸钠乳酸菌微胶囊

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王晶