牛华
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
- 供职机构：苏州大学医学部更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 沙门菌毒力基因spvB的原核表达及其多克隆抗体的制备
- 2016年
- 目的:构建沙门菌毒力基因spvB的原核表达载体,诱导表达纯化SpvB蛋白并以其为抗原免疫小鼠,制备多克隆抗体。方法:利用生物信息学软件对SpvB进行分析,选取抗原性较高、易表达的氨基酸序列作为克隆序列,以携带spvB基因的鼠伤寒沙门菌为模板,PCR扩增目的片段后与原核表达载体pET28a(+)连接;将质粒pET28a-SpvB转化大肠埃希菌BL21(DE3)后诱导表达并纯化。目的蛋白免疫小鼠,制备抗SpvB多克隆抗体,Western blot检测抗体特异性。结果:成功构建spvB原核表达载体,经IPTG诱导结果显示,重组蛋白表达且主要存在于包涵体中,将纯化后的蛋白免疫小鼠Western blot检测血清中抗体与SpvB特异性结合。结论:获得具有免疫原性的SpvB蛋白及其多克隆抗体,为进一步研究该基因的功能奠定基础。
- 燕婧牛华李嫄渊张跃华黄瑞
- 关键词：沙门菌原核表达抗体
- 嗜吞噬细胞无形体aph0653的克隆表达及重组蛋白的抗原性分析被引量：2
- 2017年
- 目的:克隆表达嗜吞噬细胞无形体(Anaplasma phagocytophilum,AP)APH0653基因,并对表达产物进行抗原性分析。方法:以嗜吞噬细胞无形体基因组DNA为模板,使用特异性引物,PCR扩增APH0653基因并克隆入原核表达载体进行表达。使用镍柱亲和层析纯化重组蛋白,并应用免疫印迹方法检测APH0653与嗜吞噬细胞无形体感染血清的免疫反应性。结果:菌落PCR、DNA测序和SDS-PAGE蛋白凝胶电泳表明APH0653基因已成功克隆入原核表达载体,并可诱导表达重组蛋白。免疫印迹实验表明AP阳性血清可识别重组蛋白APH0653,并产生明显的特异性条带。结论:嗜吞噬细胞无形体APH0653蛋白可在原核表达系统中高效表达,且重组蛋白具有较好的抗原性。
- 徐文婷贺美玲张磊黄瑞牛华
- 关键词：人粒细胞无形体病抗原性
