郭虹敏
- 作品数：9 被引量：7H指数：2
- 供职机构：聊城市人民医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金山东省中医药科技发展计划项目陕西省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- PB-GF转座子系统的构建及其在真核细胞中转座的研究被引量：1
- 2014年
- 目的构建能在真核细胞中发生转座的PB-GF(piggyBac gene-finder)转座子系统,作为发现和研究编码基因的工具。方法通过克隆技术,构建PB转座子载体pPB[CMV-neo]和PB转座酶表达载体pCAG-PBase,转染HeLa细胞,G418筛选和亚甲基蓝染色,验证PB转座酶在真核细胞中的转座能力。构建PB转座子载体pPB[β-Gal-pA/act-EGFP],使其包含两侧翼端加入PB转座酶识别位点反向末端重复序列(ITR),ITR1和ITR2,以及启动子陷阱和PolyA陷阱的DNA片段;同时与PB转座酶表达载体pCAG-PBase一起,构成PB-GF转座子系统。将PB-GF转座子系统转染HeLa细胞,通过荧光显微镜和流式细胞仪检测PolyA陷阱报告基因EGFP的表达;通过X-gal染色,观察启动子陷阱报告基因β-Gal的表达,明确PB-GF转座酶系统在真核细胞中的转座情况。结果成功构建成以转座子PiggyBac为基础的,含有启动子和PolyA陷阱的PB-GF转座子系统,并用该系统转染HeLa细胞24 h后观察到有相当数量的EGFP和LacZ阳性的细胞出现,转座效率高达26%。结论成功构建PB-GF转座子系统并可以在真核细胞中发生转座。
- 雷占翔刘芳芳于才勇卞干兰郭虹敏刘玲薛茜鞠躬王键
- 关键词：转座子基因组
- IVF/ICSI-ET女性AMH、TSH、FORT水平及预测妊娠结局
- 2023年
- 目的:探讨不孕症行体外受精或卵母细胞卵胞浆内单精子显微注射-胚胎移植(IVF/ICSI-ET)女性抗苗勒氏管激素(AMH)、促甲状腺激素(TSH)、卵泡输出率(FORT)水平及预测妊娠结局价值。方法:收集2018年1月-2022年6月本院辅助生殖医学中心收治的407例行IVF/ICSI-ET治疗的不孕症患者临床资料,根据IVF/ICSI-ET治疗后妊娠结局分为妊娠组228例和未妊娠组179例。在IVF/ICSI-ET启动前一周期的月经第2 d天检测患者AMH及TSH水平,行阴道超声检查卵泡情况计算FORT,并与获卵数目、卵子成熟率、受精率、优质胚胎率的相关性,以受试者工作特征曲线(ROC)分析预测卵泡发育及妊娠结局价值。结果:妊娠组AMH水平(5.12±1.53 ng/ml)高于未妊娠组(3.66±1.14 ng/ml),TSH水平(2.19±0.60 mU/L)低于未妊娠组(2.87±0.85 mU/L),FORT(90.42±6.28)%高于未妊娠组(81.36±8.53)%(均P<0.05)。AMH与获卵数目、卵子成熟率呈正相关,TSH与获卵数目呈负相关,FORT与获卵数目呈正相关(均P<0.05)。AMH、TSH及FORT预测妊娠结局的曲线下面积分别为0.791、0.744、0.836,灵敏度分别为72.5%、70.3%、86.8%,特异度77.8%、66.7%、69.4%。结论:不孕症女性AMH、TSH、FORT与IVF/ICSI-ET获卵数目、卵子成熟率具有关联,对妊娠结局有一定的预测价值。
- 侯东升郭艳霞孙昕卉郭虹敏李辉
- 关键词：抗苗勒氏管激素
- 醛糖还原酶通过cAMP反应元件结合蛋白通路调控小胶质细胞向M2型极化被引量：1
- 2014年
- 目的探讨醛糖还原酶(AR)调控小胶质细胞极化的机制。方法体外培养BV2小胶质细胞,给予醛糖还原酶抑制剂(ARI),通过免疫组织化学染色和酶标仪检测荧光强度的方法检测细胞4-羟基反式-2-壬烯酸(HNE)表达;体外培养N9小胶质细胞,分别用脂多糖(LPS)、HNE、醛糖还原酶抑制剂fidarestat(ARI)及其组合刺激后,利用Western blot法检测在不同刺激条件下N9细胞调控细胞极化和极化相关蛋白的变化;在上述刺激的条件下,联合应用cAMP反应元件结合蛋白(CREB)抑制剂KG-501,利用Western blot法检测极化相关蛋白的变化。结果阻断AR后使HNE在BV2细胞内堆积;Western blot法检测发现ARI通过增加磷酸化CREB的表达来调控N9细胞向M2型极化;应用CREB抑制剂后,能阻断上述过程。结论阻断AR可以使CREB的表达上调进而促进小胶质细胞向M2型极化。
- 张倩刘玲薛茜郭虹敏刘芳芳卞干兰于才勇鞠躬王键
- 关键词：醛糖还原酶脊髓损伤小胶质细胞CREB
- 姜黄素对小鼠卵母细胞体外成熟及早期胚胎发育的影响被引量：2
- 2021年
- 目的探讨姜黄素对小鼠卵母细胞体外成熟质量及早期胚胎发育能力的影响。方法获取小鼠卵丘卵母细胞复合体(COC),分别用含(0、5、10、15)μmol/L姜黄素的体外成熟培养液培养18 h。根据卵母细胞极体的排出计算成熟率;体外受精(IVF)后根据受精率、卵裂率、囊胚形成率及囊胚细胞数判断胚胎发育情况;线粒体荧光探针Mito-Tracker Green标记法检测线粒体在卵母细胞内的分布;实时定量PCR检测线粒体合成相关基因线粒体转录因子A(TFAM)和解偶联蛋白2(UCP2)的mRNA水平;免疫荧光细胞化学染色法检测TFAM、UCP2的蛋白表达;2′,7′-二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)负载法检测卵母细胞内活性氧(ROS)水平。结果卵母细胞体外成熟率和早期胚胎发育情况各组无显著性差异;姜黄素浓度与卵母细胞内线粒体成簇分布呈正相关;5μmol/L姜黄素处理组TFAM、UCP2 mRNA表达显著高于其他各组,TFAM、UCP2的蛋白表达水平与对照组相比显著升高;5μmol/L姜黄素处理组卵母细胞内ROS水平显著低于对照组。结论姜黄素处理显著改变小鼠体外成熟卵母细胞中线粒体的分布,增加线粒体合成相关基因的表达,降低卵母细胞内ROS水平,但并未对体外成熟率及早期胚胎发育能力造成显著的影响。
- 郭虹敏李海艳孙昕卉魏德莉张海静李雪王敏
- 关键词：姜黄素卵母细胞体外成熟体外受精
- 程序性死亡配体2(PD-L2)多克隆抗体在小鼠组织中的交叉反应性研究
- 2013年
- 程序性死亡分子-1(programmed death1,PD-1,由pdcd1基因编码)和它的2个配体PD-L1和PD-L2组成一条重要的抑制性免疫信号通路来防御体外微生物和维持自身免疫耐受.与B7-CD28家族的其他分子不同的是,PD-L1和PD-L2的表达并不局限于免疫系统.本研究发现,一种识别小鼠PD-L2(mPD-L2)胞外段的多克隆抗体(R&D Systems,MN,USA)可以和多种小鼠组织中的相应抗原结合,这些组织包括:垂体前叶和中间叶、嗅球、嗅上皮、舌上皮、角质上皮细胞、皮肤和胡须的毛囊.这一发现不同于以前关于mPD-L2分子组织定位的报道.然而,随后应用RT-PCR和Western印迹等方法,均未在上述组织中检测到PD-L2的转录本和蛋白,结果提示小鼠的PD-L2多克隆抗体可能与组织内其他抗原存在免疫交叉反应.小鼠发育研究显示,mPD-L2样的抗原最早表达在胚胎12.5天(E12.5)的嗅上皮中;胚胎期14.5天(E14.5)时,皮肤、舌以及皮肤和胡须的毛囊均可见mPD-L2样抗原的表达;从胚胎期18.5天(E18.5)开始,mPD-L2样抗原的分布模式与成年小鼠的分布模式基本一致.生物信息学分析和其他实验结果提示,与PD-L2多克隆抗体起交叉反应的候选蛋白可能是神经细胞黏附因子(NCAM)和Hemicentin-1.结果表明,利用这种PD-L2多克隆抗体检测mPD-L2分子在中枢神经系统和上皮组织,如嗅上皮的表达时,对于染色结果的解释需要特别谨慎.此外,这种PD-L2多克隆抗体也可用于标记小鼠胚胎发育过程中的嗅上皮细胞.
- 赵宇卞干兰于才勇刘芳芳刘玲郭虹敏郭俊鞠躬王键
- 关键词：交叉反应性PD-L2免疫反应性NCAM
- 一例田园犬会阴疝的诊疗被引量：1
- 2023年
- 现结合一例田园犬的一般检查、X射线检查、血液生化检查,诊断病犬患有会阴疝。采用肛门外括约肌与尾骨肌对缝、闭孔内肌反转90度对缝,臀浅肌移位(45°旋转)、半腱肌移位(180°旋转),生物补片(新型网格状材料)进行手术修复,术后恢复良好。目前没有相应的科学方法进行会阴疝的预防,注意术后护理可以大大降低复发率。
- 黎婷郭志伟郭虹敏张海燕黄亚男
- 关键词：会阴疝
- Exendin-4对MCAO再灌注导致的脑缺血/再灌注损伤具有神经保护作用被引量：2
- 2020年
- 目的探讨GLP-1受体激动剂Exendin-4腹腔给药对大脑中动脉闭塞(MCAO)再灌注所致大鼠脑缺血/再灌注损伤的神经保护作用。方法SD大鼠术前1 h腹腔注射Exendin-4,MCAO再灌注24 h后进行神经功能缺损评分,TTC染色计算脑梗死体积,免疫荧光观察神经元和小胶质细胞生存数量及检测凋亡通路相关蛋白的相对表达水平。结果Exendin-4能够保护由于MCAO再灌注后所致的脑缺血再灌注损伤,减少了脑梗死体积,降低皮层凋亡蛋白的相对表达水平,抑制神经元凋亡。结论Exendin-4可以对MCAO再灌注所致脑缺血/再灌注损伤具有神经保护作用,该作用是通过抑制凋亡蛋白的产生,从而抑制细胞凋亡。
- 王晗雷占翔郭虹敏
- 关键词：EXENDIN-4小胶质细胞
- 小鼠PD-L1胞外段基因的原核表达及活性分析
- 2014年
- 目的原核表达小鼠程序性死亡分子1配体胞外段(exPD-L1)蛋白基因并在体外初步验证其生物学活性。方法应用小鼠脾脏细胞总RNA,反转录PCR克隆exPD-L1基因序列,将其克隆到pGEX-4T-1载体中构建原核表达载体pGEX-4T-1-exPD-L1,经酶切和测序鉴定正确后,转化到E.coli BL21(D3)中,经IPTG诱导表达后,对包涵体蛋白进行复性和纯化。对表达产物进行SDS-PAGE分析和Western blot法检测证明其正确后,采用GST pull-down检测融合蛋白和PD-1的相互作用,鉴定其生物学活性。结果成功构建重组质粒pGEX-4T-1-exPD-L1,并在宿主菌中成功表达相对分子质量(Mr)55 000的重组蛋白,包涵体成功复性和纯化后经Western blot法证明其正确表达,同程序性死亡分子1(PD-1)蛋白的GST pull-down结果表明融合蛋白具有生物学活性。结论成功克隆和表达小鼠exPD-L1蛋白,并证明其具有生物学活性。
- 郭虹敏陈琨于才勇卞干兰刘芳芳雷占翔薛茜鞠躬王键
- 关键词：原核表达
- 降调节方案和拮抗剂方案助孕≥40岁合并卵巢储备功能减退患者的结局分析
- 2023年
- 目的比较卵巢储备功能减退、高龄(≥40岁)患者在体外受精-胚胎移植周期中采用降调节方案和拮抗剂方案的应用效果。方法回顾性分析2017年1月至2021年5月于聊城市人民医院生殖医学科行体外受精/卵胞质内单精子注射-胚胎移植助孕的≥40岁合并卵巢储备功能减退患者的临床资料,按照纳入标准共收集符合条件的142例患者均151个周期,并根据控制性促排卵方案的不同分为两组:降调组29例患者31个周期,拮抗剂组113例患者120个周期。比较两组患者的一般情况、临床治疗情况、实验室数据、临床助孕结局。统计学方法采用独立样本t检验、Wilcoxon符号秩和检验、Fisher确切概率法、χ^(2)检验。结果两组患者的年龄、不孕年限、体质量指数、基础卵泡刺激素、基础雌二醇、抗缪勒管激素及窦卵泡计数比较差异均无统计学意义(t=1.204、-1.634、0.741、-0.643、1.491、1.868、1.270,均P>0.05)。降调组使用促性腺激素天数[(10.16±2.85)d比(8.60±2.79)d]、囊胚形成率[77.78%(14/18)比39.47%(15/38)]、优质囊胚形成率[50.00%(9/18)比13.16%(5/38)]均高于拮抗剂组,差异均有统计学意义(t=2.722、χ^(2)=7.177、8.842,均P<0.05);两组受精率、双原核率、优质胚胎率比较差异均无统计学意义(χ^(2)=0.018、0.662、2.375,均P>0.05);降调组新鲜移植临床妊娠率[22.73%(5/22)比11.11%(3/27)]、活产率[13.64%(3/22)比3.70%(1/27)]均高于拮抗剂组,降调组流产率低于拮抗剂组[40.00%(2/5)比75.00%(2/3)],但差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论对于≥40岁合并卵巢储备功能减退的高龄不孕女性,采用降调节方案有增加临床妊娠率、降低流产率的趋势。
- 李辉郭艳霞孙昕卉郭虹敏侯东升
- 关键词：拮抗剂方案
