别延红
- 作品数：2 被引量：13H指数：2
- 供职机构：中山市小榄人民医院更多>>
- 发文基金：广东省中山市科技计划项目广东省科技计划工业攻关项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 转录因子增强激活子结合蛋白-4对子宫内膜癌细胞恶性增殖的影响被引量：5
- 2016年
- 目的利用体外细胞模型,研究转录因子增强激活子结合蛋白-4(TFAP4)对子宫内膜癌细胞恶性增殖的影响及探讨其可能的作用机制。方法利用小干扰RNA技术沉默子宫内膜癌细胞(HEC-1-A和RL95-2)内源性增强激活子结合蛋白-4(AP-4)的表达后,通过平板克隆及软琼脂克隆形成实验检测肿瘤细胞单克隆形成及非锚定生长能力的变化。利用碘化吡啶染色流式细胞术分析肿瘤细胞周期的变化,并利用荧光定量PCR技术检测CDKN1A的转录水平。利用生物信息学分析预测CDKN1A的启动子区域内是否存在AP-4及锌指蛋白Pokemon的结合位点,进一步利用染色体免疫共沉淀技术验证AP-4及Pokemon是否共同结合到CDKN1A的启动子区域。每次实验设3个复孔,每个实验重复3次以上,两组间数据比较采用t检验,多组间数据比较采用单因素方差分析,检验水平α=0.05。结果沉默内源性AP-4的表达后,两种子宫内膜癌细胞(HEC-1-A和RL95-2)的克隆形成能力降为0.38倍至0.55倍,软琼脂克隆形成能力降为0.21倍至0.27倍。进一步发现,沉默内源性AP-4的表达能诱导两种子宫内膜癌细胞发生G0/G1期阻滞并增加CDKN1A的转录水平为7.34倍至9.22倍。公共数据库分析显示,CDKN1A的启动子区域内存在AP-4及Pokemon相邻的结合位点,沉默内源性AP-4后能同时降低AP-4及Pokemon与CDKN1A的启动子区域的结合,其中AP-4的富集率降至0.07倍至0.21倍,Pokemon的富集率降至0.04倍至0.18倍。结论沉默内源性AP-4能在体外模型中,抑制子宫内膜癌细胞的恶性增殖,其机制可能与破坏了AP-4/Pokemon转录复合物对CDKN1A的转录抑制,从而阻抑了肿瘤细胞的周期运行。
- 别延红宋林泉郑志明王金生蔡育波刘琼茹张鑫曾今诚
- 关键词：子宫内膜肿瘤恶性增殖
- 转录因子增强子结合蛋白-4基因沉默对子宫内膜癌细胞凋亡的影响被引量：10
- 2017年
- 目的观察内源性转录因子增强子结合蛋白-4(AP-4)沉默对子宫内膜癌细胞凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制。方法将人子宫内膜癌细胞(HEC-1-A和RL95-2)分为NC组、si#1组、si#2组,si#1组转染siTFAP4片段1,si#2组转染si-TFAP4片段2,NC组转染对照siRNA。采用Hoechest 33258染色观察凋亡核形态,采用Annexin V-FITC/PI染色流式细胞术测算细胞凋亡率,采用real-time PCR技术检测存活素(Survivin)mRNA表达,采用生物信息学分析预测Survivin编码基因BIRC5的启动子区域内是否存在AP-4的结合位点,采用染色体免疫共沉淀技术验证AP-4是否结合到BIRC5的启动子区域,采用双荧光素酶报告系统检测BIRC5的启动子转录激活情况。结果在HEC-1-A、RL95-2细胞中,与NC组相比,si#1组、si#2组凋亡核型细胞数均增加,细胞凋亡率均增加,Survivin mRNA相对表达量均减少(P均<0.05)。BIRC5的启动子区域内存在一个高置信度的AP-4结合位点,沉默HEC-1-A、RL95-2细胞内源性AP-4后能降低AP-4对BIRC5启动子区域的结合并抑制其转录激活状态。结论沉默内源性AP-4能诱导子宫内膜癌细胞凋亡,其机制可能为降低了AP-4对Survivin的转录激活,从而诱导了肿瘤细胞的凋亡。
- 别延红李纳吴又明王金生耿文静蓝海龙陈光辉
- 关键词：存活素细胞凋亡
