袁潇
- 作品数：4 被引量：10H指数：3
- 供职机构：江苏大学医学院更多>>
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- 胃癌细胞诱导脐带MSCs向癌相关MSCs转分化研究
- 2015年
- 该文探讨了胃癌细胞培养液上清对人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,huc MSCs)向癌相关MSCs转分化的作用及转分化后的MSCs对胃癌细胞增殖和迁移的影响。收集胃癌细胞HGC-27的培养液上清,与等体积的低糖DMEM混合后培养huc MSCs 48 h,检测处理后huc MSCs中癌相关MSCs蛋白及mi R-221表达的改变。用诱导后的huc MSCs培养液上清与等体积的高糖DMEM混合后培养HGC-27 48 h,检测处理前后HGC-27的增殖和迁移能力的变化。将huc MSCs和HGC-27共培养,检测共培养后HGC-27增殖和迁移能力。结果发现,胃癌细胞培养液上清处理后,huc MSCs中波形蛋白(vimentin)和成纤维细胞活化蛋白(fibroblast activation protein,FAP)表达增强,mi R-221表达上调。用处理后的huc MSCs培养液上清培养HGC-27,细胞增殖以及迁移能力增强。共培养后HGC-27的增殖及迁移能力显著增强。以上结果表明,胃癌细胞培养液上清可诱导huc MSCs获得癌相关MSCs样表型和促进胃癌细胞增殖和迁移的功能,为肿瘤微环境细胞的重塑性和脐带MSCs应用的安全性评估提供实验依据。
- 梁炜朱梦楚袁潇田伊卿王梅钱晖许文荣
- 关键词：间充质干细胞转分化肿瘤微环境胃癌
- 胃癌间质干细胞调节中性粒细胞极化的作用及分子机制被引量：3
- 2016年
- 目的 :探讨胃癌间质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)条件培养液对调节中性粒细胞极化的作用及可能的分子作用机制。方法:采用免疫组织化学和HE染色法检测胃癌组织中中性粒细胞和MSCs的浸润情况。采用趋化实验检测胃癌MSCs条件培养液对中性粒细胞的趋化作用;用胃癌MSCs条件培养液处理中性粒细胞18 h后,FCM法检测中性粒细胞的凋亡情况;实时荧光定量PCR法检测中性粒细胞中抗凋亡相关基因MCL-1以及极化相关基因自杀相关因子(factor associated suicide,FAS)、细胞间黏附分子-(1intercellular cell adhesion molecule-1,ICAM-1)、单核细胞趋化蛋白1(monocyte chemotactic protein 1,MCP1,又称为CCL2)和白细胞介素8(interleukin-8,IL-8)m RNA的表达情况。将胃癌MSCs条件培养液处理的中性粒细胞作用于胃癌SGC-7901细胞,采用Transwell小室迁移实验检测对胃癌SGC-7901细胞迁移能力的影响。蛋白质印迹法检测胃癌MSCs条件培养液处理的中性粒细胞中细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)信号通路的活化情况。结果 :胃癌组织中存在中性粒细胞和MSCs的浸润。胃癌MSCs条件培养液能高效诱导中性粒细胞的趋化(P<0.01);胃癌MSCs条件培养液处理后的中性粒细胞,凋亡率明显下降(P<0.05),MCL-1 m RNA的表达水平则明显上调(P<0.05);极化相关基因FAS和ICAM-1 m RNA的表达水平明显下调(P<0.05和P<0.01),CCL2和IL-8 m RNA的表达水平均明显上调(P值均<0.01)。SGC-7901细胞与胃癌MSCs条件培养液预处理的中性粒细胞共培养后,其迁移能力明显增强(P<0.01)。胃癌MSCs条件培养液预处理中性粒细胞15 min后,中性粒细胞中磷酸化ERK(phospho-ERK,p-ERK)蛋白的表达水平显著升高(P<0.05)。结论 :胃癌MSCs条件培养液能够调节中性粒细胞趋化并抑制其自发性凋亡;诱导中性粒细胞N2型极化并促进胃癌细胞迁移;这可能与中性粒细胞内ERK信号通路被激活相关。
- 朱琼芳张徐袁潇牛健
- 关键词：胃肿瘤间质干细胞中性粒细胞极化
- 婆罗双树样基因4慢病毒干扰载体构建及对MGC80-3转移潜能的影响被引量：4
- 2016年
- 目的人婆罗双树样基因4(spalt-like transcription factor 4,SALL4)是近年来新发现的癌基因,具有促进肿瘤生长和转移的作用。本研究旨在构建可诱导shRNA基因干扰SALL4慢病毒载体并转染胃癌细胞建立稳定细胞株,探讨SALL4基因沉默对胃癌细胞转移潜能的影响。方法合成特异性靶向人SALL4基因的shRNA序列,连接入TetpLKO-puro慢病毒载体;脂质体法介导重组慢病毒质粒系统转染293T细胞,包装产生慢病毒;收集病毒上清,转染人胃癌细胞株MGC80-3,嘌呤霉素筛选获得阳性克隆,采用四环素(tetracycline,Tet)诱导shRNA表达。同时设立shRNA对照组。荧光定量RT-PCR检测SALL4mRNA水平;蛋白质印迹检测SALL4蛋白水平;Transwell迁移实验检测细胞迁移能力;荧光定量RT-PCR和蛋白质印迹分别检测干性指标Oct4和上皮-间质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)指标E-cadherin、Slug和Twist基因及蛋白表达水平。结果 PCR结果表明,SALL4shRNA序列已成功连入Tet-pLKO-puro慢病毒载体。荧光定量RT-PCR结果表明,对照组Tet-PLKO-shCtrl细胞在Tet诱导前后,SALL4mRNA水平分别为1.015±0.150和0.932±0.127,P=0.580;实验组Tet-PLKO-shSALL4细胞在Tet诱导前后,SALL4mRNA水平分别为1.000±0.028和0.443±0.017,P<0.001。蛋白质印迹结果显示,SALL4蛋白与mRNA变化一致。Transwell迁移实验显示,对照组Tet-PLKO-shCtrl细胞Tet诱导前后,迁移细胞数分别为(327±66)和(330±50)个,P=0.856;Tet-PLKO-shSALL4细胞Tet诱导前后,迁移细胞数分别为(335±44)和(100±23)个,P<0.001。荧光定量RT-PCR检测结果表明,Tet-PLKO-shSALL4细胞Tet诱导后,干性指标Oct4及EMT指标Slug和Twist mRNA水平分别为0.140±0.003、0.532±0.047和0.652±0.033,P值分别为<0.001、0.008和0.035;E-cadherin mRNA水平增加至8.994±0.689,P<0.001。对照组经Tet诱导,Oct4、Slug、Twist和E-cadherin基因表达水平分别为1.180±0.010、0.931±0.016、0.978±0.036和1.330±0.371,P值分别为0.063、0.086、0.646和0
- 袁潇梁炜邵孟张斌史惠钱晖许文荣张徐
- 关键词：SALL4慢病毒载体EMT胃癌
- 中性粒细胞促进胃癌细胞体外迁移能力被引量：3
- 2016年
- 目的探讨中性粒细胞体外对胃癌细胞生物学特性的影响及机制。方法采用胃癌细胞条件培养基作用于中性粒细胞,实时荧光定量PCR检测其炎症因子基因(IL-8、CCL2、TNF-α)表达情况。用活化后的中性粒细胞条件培养基作用于胃癌细胞,MTT实验检测胃癌细胞增殖情况,流式细胞术分析胃癌细胞的细胞周期,细胞划痕实验检测胃癌细胞迁移能力,western blot检测胃癌细胞信号通路蛋白表达情况。结果经胃癌细胞条件培养基作用后,中性粒细胞IL-8、CCL2和TNF-α等炎症因子基因表达明显上调(P<0.05);活化的中性粒细胞条件培养基能够显著促进胃癌细胞体外迁移(P<0.01),但对胃癌细胞增殖无明显影响(P>0.05);经活化的中性粒细胞条件培养基作用后,胃癌细胞STAT3和ERK1/2信号通路蛋白磷酸化增加(P<0.05)。结论胃癌细胞条件培养基能够诱导中性粒细胞活化,通过分泌炎症因子激活胃癌细胞STAT3和ERK1/2信号通路促进其体外迁移能力。
- 朱琼芳张文袁潇许文荣张徐
- 关键词：胃癌中性粒细胞活化炎症因子迁移
