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大肠杆菌三型分泌系统2(ETT2)缺失对禽致病性大肠杆菌生物被膜形成及致病性的影响: 【研究目的】为了研究大肠杆菌三型分泌系统2(ETT2)缺失对禽致病性大肠杆菌特生物被膜形成及致病性的影响。【材料方法】分析ETT2基因簇组分在APEC临床分离株中分布规律的基础上,构建ETT2缺失突变株,开展与生物被膜形...; 祁克宗尹磊宋祥军涂健; 关键词：禽致病性大肠杆菌生物被膜形成; 文献传递

非编码小RNA（RyhB）调控禽致病性大肠杆菌毒力的分析: 禽大肠杆菌病是由禽致病性大肠杆菌（Avian Pathogenic Escherichia coli,APEC）引起的一种人畜共患传染病,给养禽业的发展带来了严重的危害,并可威胁公共卫生安全,因其致病机理复杂、血清型多、...; 涂健祁克宗尹磊; 关键词：禽致病性大肠杆菌基因敲除细菌毒力

禽致病性大肠杆菌PhoP蛋白调控宿主菌DNA检测方法的建立与应用: 2015年; [目的]建立检测禽致病性大肠杆菌phoP蛋白调控宿主菌DNA的方法,为进一步研究phoP蛋白的调控因子奠定基础。[方法]将pho P基因克隆至p MD19-T载体,序列鉴定正确后转至表达载体pET32a,将重组质粒pET32a-phoP导入感受态细菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析蛋白的大小,用Ni-NTA亲和层析柱纯化重组phoP蛋白。通过生物信息学分析法对phoP蛋白与DNA的结合基序进行预测,利用凝胶迁移试验(EMSA)鉴定该蛋白的结合活性。[结果]酶切及测序结果表明原核表达质粒构建正确;SDS-PAGE结果表明目的基因得到表达;重组目的蛋白相对分子质量约为42.9×103;用Ni-NTA亲和层析柱成功纯化获得了纯度大于90%的目的蛋白;凝胶迁移试验结果表明phoP蛋白能够结合血清毒力基因iss和溶血基因hly F启动子区。[结论]禽致病性大肠杆菌phoP重组蛋白成功表达且有结合iss和hly F基因启动子区的功能活性,说明phoP蛋白能够调控iss和hly F的表达。; 王曼祁克宗涂健周秀红刘红梅王惠珂尹磊; 关键词：禽致病性大肠杆菌

pagP基因对禽致病性大肠杆菌抗菌肽抗性和致病性的影响被引量：2: 2017年; 【目的】禽致病性大肠杆菌(Avian pathogenic Escherichia coli,APEC)不仅严重影响全球的养禽业,对人类公共健康也造成巨大的潜在威胁。pag P基因在细菌的抗菌肽抗性和致病性方面发挥重要作用,但关于pag P基因在APEC中的功能尚不清楚。本文构建禽致病性大肠杆菌pag P基因缺失株,对缺失株的抗菌肽抗性和致病性进行研究。【方法】利用Red重组系统构建APEC的pag P基因缺失株,然后利用回复质粒构建回复株。研究pag P基因对细胞黏附与入侵、生物被膜形成能力、外膜渗透性、抗菌肽敏感性、致病性等方面的影响。【结果】成功构建pag P基因缺失株和回复株,抗菌肽抗性试验发现pag P基因缺失株对多粘菌素B、鸡β-防御素2(AVBD2)的敏感性显著增加(P<0.01),致病性试验结果表明pag P基因缺失株的毒力显著降低(P<0.01)。【结论】APEC的pag P基因对AVBD2的敏感性和APEC的致病性密切相关,为深入研究pag P基因的功能及调控作用奠定了基础。; 宋祥军李春晓祁克宗涂健薛媚尹磊; 关键词：禽致病性大肠杆菌抗菌肽

APEC毒力岛核心基因irp2、fyua缺失对其致病性的影响: 禽致病性大肠杆菌病(Avian Pathogenic Escherichia coli.APEC)是引起禽类高死亡率的重要传染病之一,给养禽业的发展带来了严重危害.而耶尔森菌强毒力岛(high pathogenicity...; 涂健邵颖祁克宗刘红梅黄博言尹磊

非编码小RNA(RyhB)调控禽致病性大肠杆菌毒力相关基因的分析被引量：3: 2015年; 以小RNA(RyhB)为研究对象,探索RyhB对禽致病性大肠杆菌相关毒力基因的调控研究。采用Red同源重组技术构建APEC野生株(AE17)RyhB的缺失株△RyhB以及构建出回复株△RyhB-comp。运用活菌计数法分别观察AE17、△RyhB、△RyhB-comp黏附鸡胚成纤维细胞DF-1的能力,并且利用Real-time PCR检测AE17、△RyhB和△RyhB-comp的8个毒力基因转录水平。结果成功构建出了基因缺失株△RyhB和回复株△RyhBcomp,△RyhB黏附细胞能力较AE17均有显著地降低,约为AE17的62.5%,△RyhB-comp较△RyhB黏附能力显著上升,为△RyhB的1.4倍。同时,Real-time PCR结果显示,△RyhB的bcfA、fyuA、tsh、luxS、fimC、ompA毒力基因的转录水平均极显著下降(P<0.01),其mRNA转录水平分别约为AE17的19%、52%、20%、14%、28%、52%;△RyhB的iss、ibeA毒力基因表达水平分别上调约1.14倍和1.2倍。表明RyhB的缺失能够减弱APEC黏附DF-1的能力,并且使毒力基因的转录水平有所降低。根据以上结果,推测RyhB对APEC的毒力具有极其重要的调节作用。; 尹磊祁克宗涂健周秀红刘红梅王曼张艳娜; 关键词：禽致病性大肠杆菌 RED同源重组 RYHB 毒力基因

禽致病性大肠杆菌双组分系统phoP/Q对鞭毛Ⅲ型分泌系统基因的调控预测被引量：4: 2019年; 本研究旨在探究禽致病性大肠杆菌(APEC)中双组分系统phoP/Q与鞭毛Ⅲ型分泌系统(鞭毛T3SS)蛋白之间的联系。运用软件进行功能分析,预测phoP/Q与鞭毛T3SS的关系,利用基因芯片技术对APEC野生株和ΔphoP/Q缺失突变株进行转录组的差异性比较,筛选鞭毛T3SS基座中变化较大基因,并用荧光定量PCR检测基因表达变化量。结果显示:经STRING预测发现phoP/Q可能通过调控鞭毛T3SS基因座附近的双组分系统来间接调控鞭毛T3SS。基因芯片筛选与荧光定量PCR检测发现phoP/Q缺失能使鞭毛T3SS核心组件的大部分基因表达差异显著,同时也影响了双组分中motA、motB与cheY的表达。本研究对phoP/Q双组分系统与鞭毛T3SS的关系进行了预测与探索,为进一步研究揭示细菌的活动与致病机制提供了新的切入点与研究方向。; 邓志文王泽平李倩文尹磊涂健宋祥军祁克宗; 关键词：禽致病性大肠杆菌基因芯片

非编码小RNA(RyhB)调控禽致病性大肠杆菌毒力的分析: 禽大肠杆菌病是由禽致病性大肠杆菌(Avian Pathogenic Escherichia coli,APEC)引起的一种人畜共患传染病,给养禽业的发展带来了严重的危害,并可威胁公共卫生安全,因其致病机理复杂、血清型多、...; 涂健祁克宗尹磊; 关键词：禽致病性大肠杆菌基因敲除细菌毒力

APEC毒力岛核心基因irp2、fyua缺失对其致病性的影响: 禽致病性大肠杆菌病(APEC)严重危害养禽业的发展,而耶尔森菌强毒力岛(HPI)是APEC普遍存在的一个染色体片段,本研究以APEC HPI的核心基因irp2、fyua为研究对象,开展其与APEC致病性关系的研究，构建了...; 涂健邵颖祁克宗刘红梅黄博言尹磊; 关键词：核心基因; 文献传递

非编码小RNA(RyhB)调控禽致病性大肠杆菌毒力的分析: 禽大肠杆菌病是由禽致病性大肠杆菌(Avian Pathogenic Escherichia coli,APEC)引起的一种人畜共患传染病,给养禽业的发展带来了严重的危害,并可威胁公共卫生安全,因其致病机理复杂、血清型多、...; 涂健祁克宗尹磊; 关键词：禽致病性大肠杆菌基因敲除细菌毒力; 文献传递

尹磊