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一种核酸预扩增方法及其应用: 本发明公开了一种核酸预扩增方法及其应用，本发明的方法包括以下步骤：1）选择能对双链DNA酶切后产生3-9nt随机碱基粘性末端的内切酶对包括待检测基因的核酸进行酶切，获得酶切片段；2）使用针对目标基因酶切片段设计的接头与1...; 梁兴国潘孝明; 文献传递

酶法合成RNA的相关技术研究进展被引量：1: 2016年; 近些年来RNA相关研究发展迅速,从质和量两方面对RNA合成技术提出了更高的要求。RNA合成方法包括化学合成和酶法合成两种。目前已商业化的RNA化学合成法能够实现长度小于90个碱基的RNA合成,但合成费用相对较高,使许多研究难以展开。相对于化学合成,酶法合成具有效率高、条件温和的特性,能够合成长序列,是一种高效、低耗的RNA合成方案。酶法合成的技术流程包括转录和加工两步,其中转录的模型主要分为线性转录和滚环转录两种,不同的模型产生的初始转录产物特性不同,需要采用相应的加工方式对其进行处理才能获得准确的目的 RNA产物。近年来研究者们不断地研究探索RNA的酶法合成,发现并构建了多种转录模型和初始转录物的加工方案,将从酶法合成RNA的转录模型和加工技术的原理、特点和问题等方面进行概述,以期为后续酶法合成RNA的进一步研究和选择性应用提供参考。; 王静潘孝明刘宇梁兴国; 关键词：RNA 酶法合成

反向重复序列DNA的PCR扩增特性研究被引量：2: 2016年; 旨在研究反向重复序列形成的发卡结构对模板扩增的影响。研究DNA发卡结构中环部大小、茎部长度、引物相对于茎部位置等对PCR扩增效率的影响,探讨如何通过引物设计及改变退火温度等条件来实现发卡结构DNA的有效扩增的方法。结果显示,如果引物的位置同发卡结构茎部5'序列相同或部分相同,则由于发卡结构的形成阻碍引物与模板结合而对PCR产生抑制作用,并且抑制作用随着茎部长度的增加而增强;当环部的长度达到50 nt以上时,抑制作用明显减弱。较高的退火温度和引物浓度都有助于引物同分子内形成发卡结构的竞争,使PCR扩增更容易进行。; 李春川潘孝明王静董平李敬梁兴国; 关键词：PCR扩增

基于LM-PCR预扩增法的建立及其在水产品致病菌检测中的应用: 基于核酸扩增技术的基因检测方法具有高灵敏度与高特异性的优点,但在对实际样品的检测中,核酸扩增检测技术往往受到样品中目标DNA含量极少、破坏程度高、提取得到的模板含有大量背景核酸等因素制约,导致检测效率下降,影响了其在相关...; 潘孝明; 关键词：水产品致病菌接头结构单核苷酸多态性

滚环转录结合定点切割制备小RNA的技术探究: 2016年; [目的]优化滚环转录及定点酶切中关键技术,提高小RNA合成量。[方法]通过在引物与模板之间设计不互补部分,形成泡状凸起,引发滚环转录;使用天然DNAzyme 10-23定点剪切转录产物;另外改变RNase H酶切中Aid-DNA修饰核酸数目及位置,指导RNase H切割;DNaseⅠ降解模板DNA后,不经高温失活,直接进入RNase H酶切体系。[结果]由凸起结构引发转录,转录效率提高约5倍;RNase H在仅有3个修饰核酸间隔分布的Aid-DNA-3b辅助下,可高效定点剪切,而DNAzyme 10-23无法充分切割滚环转录产物;未失活的DNaseⅠ对Aid-DNA-3b的降解仅占8.7%,可直接进入RNase H酶切体系。[结论]引入凸起结构可提高转录效率约5倍;DNaseⅠ可直接进入酶切体系,随后使用Aid-DNA-3b介导酶切,产量可提高1.4倍。; 李灿王星宇王静潘孝明董平梁兴国; 关键词：DNAZYME RNASE H 小RNA

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潘孝明