许波 作品数:23 被引量:65 H指数:6 供职机构: 第三军医大学西南医院 更多>> 发文基金: 重庆市自然科学基金 国家自然科学基金 国家重点基础研究发展计划 更多>> 相关领域: 医药卫生 文化科学 更多>>
Survivin siRNA抑制人腺样囊性癌ACC-2细胞移植瘤血管生成 被引量:7 2010年 目的观察siRNA抑制生存素survivin基因对裸鼠皮下人腺样囊性癌ACC-2细胞移植瘤血管生成的影响。方法裸鼠15只完全随机分为3组(n=5):①干扰质粒组,皮下接种survivinRNA干扰质粒转染的ACC-2细胞;②瘤体注射组,皮下接种正常ACC-2细胞15d成瘤后,将针对survivin的siRNA真核表达载体脂质体法作瘤体内及瘤周注射;③肿瘤细胞组,皮下接种正常ACC-2细胞。25d后处死全部裸鼠,剥离瘤体,测量瘤体体积,RT-PCR检测瘤体组织VEGFmRNA表达,HE染色和免疫组化染色法观察VEGF阳性染色及其微血管参数。结果干扰质粒组和瘤体注射组VEGF电泳条带的相对光密度比值(0.698±0.023、0.612±0.038)及总体微血管密度[(4.98±1.43)、(5.08±1.29)个]、有腔微血管密度[(2.98±1.05)、(3.10±1.23)个]、有腔血管周长[(68.60±15.98)、(70.12±14.19)μm]及管腔面积[(4119.14±698.12)、(4339.67±599.76)μm2]较肿瘤细胞组VEGF电泳条带的相对光密度比值(0.912±0.039)及总体微血管密度[(8.90±1.36)个]、有腔微血管密度[(5.89±1.68)个]、有腔血管周长[(129.48±25.68)μm]及管腔面积[(6952.74±1298.54)μm2]低(P<0.05),而干扰质粒组和瘤体注射组无明显差别(P>0.05)。结论 survivinsiRNA能够抑制腺样囊性癌瘤体生长,并在体内通过抑制腺样囊性癌VEGF表达有效减少肿瘤血管生成。 富凯 杨军 汪欣 许波关键词:SURVIVIN ACC-2细胞 血管生成 siRNA干扰survivin表达对腺样囊性癌细胞株ACC-M的抑制作用 被引量:2 2008年 目的探讨靶向survivin基因RNAi对腺样囊性癌增殖的抑制效应。方法设计、合成siRNA(small interfering RNA),构建表达载体pGenesil-shRNA-survivin,将重组质粒导入人腺样囊性癌ACC-M细胞株。采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western-blot法分别检测转染后的ACC-M细胞中survivin mRNA和蛋白表达的变化,用噻唑蓝(MTT)法来检测细胞的增殖。结果测序证实表达载体构建成功,在pGenesil-shRNA-survivin的ACC-M细胞株中,survivin mRNA及蛋白表达明显降低,ACC-M细胞增殖受到抑制。结论pGenesil-shRNA-survivin重组质粒能有效抑制腺样囊性癌细胞增殖。 汪欣 杨军 许波 熊宇 张从纪关键词:RNAI 腺样囊性癌细胞株 SURVIVIN 外源性神经生长因子对三叉神经损伤修复的影响 2002年 目的 :探讨外源性神经生长因子 (NGF)对三叉神经损伤修复过程中神经元凋亡及神经电生理的影响。方法 :建立大鼠三叉神经下颌支离断 -硅胶管桥接模型 ,局部给予NGF或生理盐水。采用原位末端标记法 ,研究伤后三叉神经感觉核区神经元细胞的凋亡改变 ;采用电生理方法观察修复过程中感觉神经元电生理的变化。结果 :外源性NGF可减少损伤后三叉神经感觉核神经元细胞的凋亡 ,同时对三叉神经下颌支损伤后神经元动作电位的恢复有促进作用。结论 :外源性NGF在损伤局部应用 ,能够通过抑制神经元细胞凋亡 。 许波 杨军 苏踊跃关键词:神经生长因子 三叉神经 创伤 动作电位 细胞周期 葛佬素的原核表达及其在牙髓细胞中的抗炎效应研究 2005年 目的:采用原核表达系统表达抗菌肽葛佬素,并观察其对原代牙髓细胞炎性细胞因子IL-1β分泌的影响。方法:应用pET原核表达系统进行目的蛋白的表达,应用蛋白免疫印迹对蛋白进行鉴定,并采用ELISA方法,观察重组葛佬素对内毒素诱导的牙髓细胞IL-1β释放的影响。结果:原核表达产物经蛋白免疫印迹鉴定,为融合有聚组氨酸标签的葛佬素抗菌肽,ELISA检测结果表明,该表达产物能够以剂量依赖方式抑制LPS诱导的IL-1β释放。结论:在原核表达系统中成功表达了具有生物活性的抗菌肽葛佬素,该表达产物可以抑制牙髓细胞炎性因子IL-1β的释放。 许波 周红 李慧增 鲁永玲 周继祥 杨军关键词:牙髓细胞 原核表达 内毒素 神经生长因子对大鼠三叉神经下颌支离断后神经元凋亡的影响 2002年 许波 杨军关键词:神经生长因子 周围神经缺损 细胞凋亡 NO与巨噬细胞抗肿瘤细胞毒效应的关系 被引量:1 2003年 目的 探讨LPS诱导的小鼠腹腔巨噬细胞iNOSmRNA表达 ,NO产生与巨噬细胞细胞毒作用的关系。方法 应用RT PCR、硝酸还原酶法、3HTdR掺入法分别观察LPS诱导的巨噬细胞iNOSmRNA表达、NO产生以及巨噬细胞抗肿瘤细胞毒作用。结果 LPS能够诱导iNOSmRNA表达和NO的生成。iNOS特异性抑制剂充分抑制NO生成的同时 ,显著降低巨噬细胞对HL 6 0的细胞毒作用 ,却不影响巨噬细胞对K5 6 2细胞的细胞毒作用。结论 NO是激活巨噬细胞参与的非特异性细胞免疫的重要效应分子之一 。 许波 杨军关键词:一氧化氮 肿瘤细胞 细胞毒作用 内毒素和IFN-γ对巨噬细胞的体外调变作用 目的探讨内毒素(LPS)和 IFN-γ对巨噬细胞免疫调节功能的影响。方法 LPS 或 IFN-γ体外处理小鼠腹腔原代巨噬细胞后,采用混合细胞培养结合H-TdR 掺入法,研究噬细胞对 ConA 介导的脾淋巴细胞增殖反应的影... 苏踊跃 许波 罗向东关键词:巨噬细胞 内毒素 IFN 文献传递 抗菌多肽葛佬素的原核表达纯化及活性鉴定 被引量:5 2005年 目的 原核表达抗菌肽葛佬素,并对其生物学活性进行初步鉴定。方法 应用pET原核表达系统进行目的 蛋白的表达,应用蛋白免疫印迹对蛋白进行鉴定,并采用鲎试剂法,对表达产物的生物活性进行初步鉴定。结果 体外表 达产物经蛋白免疫印迹鉴定,为融合有聚组氨酸标签的葛佬素抗菌肽,鲎试剂检测结果表明,该表达产物对LPS有明显的 中和活性。结论 在原核表达系统中成功表达了具有生物活性的抗菌肽葛佬素。 许波 周红 李慧增 鲁永玲 王良喜 丁国富关键词:抗菌肽 原核表达 内毒素 利用RTS500系统进行抗菌肽葛佬素蛋白的体外表达 被引量:1 2005年 目的:构建含目的基因葛佬素(gloverin)的重组子并通过体外快速翻译系统RTS500(rapidtranslationsystem)对其进行表达。方法:采用PCR方法扩增葛佬素cDNA,将其与表达载体pIVEX2.3连接;采用PCR及双酶切方法鉴定连接产物。将含目的基因片段的阳性重组质粒通过体外表达翻译系统RTS500,使其蛋白能在大肠杆菌(E.coli)裂解产物中进行表达。应用蛋白免疫印迹方法对表达产物进行鉴定。结果:pIVEX2.3G重组表达质粒通过体外表达翻译系统RTS500可表达出分子量约为14.4的蛋白;蛋白免疫印迹证实该蛋白为带有多聚组氨酸标签的融合蛋白。结论:抗菌肽葛佬素可在体外大肠杆菌裂解产物中进行表达。 罗平 许波 鲁永玲 周红关键词:抗菌肽 体外表达 PCR CASK在血管内皮细胞缺氧应激增殖反应中的作用 2010年 目的建立钙/钙调蛋白依赖性丝氨酸蛋白激酶(calcium/calmodulin-dependent serine protein kinase,CASK)剔降血管内皮细胞株,初步探讨其对短暂缺氧的反应性。方法采用RNAi技术和脂质体介导的细胞转染技术,建立CASK表达下调的血管内皮细胞株,并观察缺氧应激条件下培养0(常氧)、1、3、6、12h细胞增殖指数的变化。结果血管内皮细胞在短暂缺氧后细胞增殖指数升高(常氧:42.93%,1h:50.46%,3h:52.53%),随着缺氧时间延长增殖指数则低于常氧对照组(6h:40.71%,12h:25.18%)。而CASK剔降血管内皮细胞株,在1~12h缺氧应激时限内,其增殖指数无明显变化。结论 CASK剔降内皮细胞株与对照EA.hy926细胞比较,对短暂缺氧应激的增殖反应性减弱。 苏踊跃 孙林辉 邬江 徐永清 陆声 陈兵 罗向东 许波关键词:缺氧 血管内皮细胞