王斌
- 作品数：34 被引量：82H指数：6
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中央级公益性科研院所基本科研业务费专项上海市基础研究重大（重点）项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 通用型猪流感疫苗基础研究
- 引言/目的猪是流感病毒重要的中间宿主和流感病毒的基因"混合器"。对于猪流感的防控不但具有兽医学意义,更具有重要的公共卫生学意义。现行商品化的以某一特定毒株表面蛋白作为主要免疫原所制备的疫苗常因流行毒株的"抗原漂移"或"抗...
- 王斌于海杨馥如黄梦马继红亓文宝周艳君廖明童光志
- 犬细小病毒多重PCR检测方法的建立和临床应用被引量：2
- 2014年
- 犬细小病毒病是由犬细小病毒（Canine paryovir—us，CPV）引起的多发生于幼犬的致死性传染病，主要表现为出血性肠炎和心肌炎。CPV属于细小病毒科细小病毒属猫细小病毒亚群，其基因组为单股负链DNA。该病毒最早由美国学者A．K．Eugster等。
- 李涛王高玲王斌修金生胡崇伟马金友
- 关键词：犬细小病毒病PCR检测方法出血性肠炎心肌炎
- 细胞溶酶体降解A型流感病毒HA蛋白的机制研究被引量：1
- 2019年
- 为研究A型流感病毒HA蛋白在宿主细胞内的降解通路及其机制,本研究首先将表达流感病毒H5亚型HA蛋白的重组质粒和内质网应激通路相关分子XBP1共转染293T细胞,通过检测荧光素酶活性分析HA蛋白引起细胞的内质网应激水平。结果显示HA蛋白在细胞内的表达能够引起内质网应激。进一步进行药物抑制试验,结果显示部分HA蛋白通过溶酶体进行降解。采用RNA干扰、ELISA、药物处理等相关试验对溶酶体降解的3条途径逐一分析,结果显示HA蛋白未通过分子伴侣介导的自噬途径、内吞途径以及巨自噬途径降解。利用表达细胞凝集结构标志蛋白与表达HA蛋白的重组质粒共转染293T细胞,通过观察并经荧光定量,发现HA蛋白在细胞内过表达时发生凝集,随后通过溶酶体降解。本研究结果表明HA蛋白在宿主细胞内错误折叠并诱发内质网应激,错误折叠的蛋白形成凝集结构后通过溶酶体降解。本研究结果初步阐明了HA蛋白通过溶酶体降解的机制,为开发新的抗病毒手段奠定了基础。
- 姚晓雨王斌刘宇婷张晶刘鑫郑永辉
- 关键词：HA蛋白溶酶体降解凝集
- 流行性乙型脑炎病毒E蛋白单克隆抗体的制备与鉴定被引量：3
- 2010年
- 流行性乙型脑炎病毒(JEV)是一种严重危害人畜健康的虫媒病毒。表面囊膜蛋白(E蛋白)是该病毒的主要结构蛋白。本研究利用原核表达的乙型脑炎病毒SA14-14-2株结构蛋白E蛋白作为免疫原,免疫6周龄BALB/c小鼠,采用淋巴细胞杂交瘤技术进行融合,经有限稀释法获得1株特异性针对JEV E蛋白的杂交瘤细胞,命名为5D4,经测定5D4单抗亚类属于IgG2a,轻链为κ链。经Western blot证实所得杂交瘤细胞分泌的抗体可特异地与JEV E蛋白结合。结果表明,所制备的抗JEV E蛋白的单抗对病原检测具有很高的特异性,为JEV准确快速的病原诊断和JEV感染相关的基础性研究提供了物质基础。
- 赵付荣华荣虹王斌陈娜莎阿合买提.买买提步志高
- 关键词：乙型脑炎病毒E蛋白单克隆抗体
- H1亚型猪流感病毒HA基因密码子优化的DNA疫苗免疫保护效力研究
- 引言H1亚型猪流感(swine influenza,SI)是由隶属于正粘病毒科A型流感病毒属的猪流感病毒(swine influenza virus,SIV)引起的猪呼吸道疾病,是目前危害全世界养猪业的重要呼吸道疾病之一...
- 杨馥如于海王斌黄梦马继红周艳君童光志
- 文献传递
- 猪嵴病毒实时荧光定量RT-PCR方法的建立被引量：9
- 2012年
- 目的本研究根据GenBank中登录猪嵴病毒(porcine kobuvirus,PKV)株的3D蛋白序列基因特征,设计特异性引物,建立基于SYBR GreenⅠ检测PKV的实时荧光定量RT-PCR方法。结果该方法检测PKV的3D基因在6.42×102～6.42×108拷贝/μL范围内有很好的线性关系,其扩增相关系数为0.999,扩增效率为100%,扩增产物的融解曲线分析只出现1个单特异峰,融解温度为(84.94±0.24)℃,对传染性胃肠炎病毒、猪轮状病毒、猪圆环病毒、猪繁殖与呼吸综合症病毒、猪伪狂犬病毒、猪瘟病毒均检测不到荧光信号,特异性强。所建立实时荧光定量RT-PCR方法组内变异系数为0.26%～1.14%,组间变异系数0.63%～1.79%,重复性好。结论本方法的建立为PKV的早期诊断及定量分析PKV感染水平和确定感染靶器官提供新的检测方法。
- 修金生陈小权王斌李涛
- 关键词：SYBR实时荧光定量RT-PCR
- H1亚型猪流感病毒HA基因密码子优化的DNA疫苗免疫保护效力研究被引量：2
- 2011年
- DNA疫苗的免疫效果与抗原基因的表达量及表达抗原的免疫原性有直接关系。为了提高猪流感病毒（Swine influenza virus，SIV）HA基因DNA疫苗的表达量，增强其免疫效果，本研究通过人工合成的方法将H1亚型猪流感病毒A／Swine／Guangdong／1／01（H1N1）的HA基因密码子优化为猪体内偏嗜性密码子optiHA，同野生型A／Swine／Guangdong／1／01（H1N1）的HA基因分别与真核表达载体PCAGGS连接构成重组质粒PCAGGS—optiHA和PCAGGS—HA，然后分别转染293T细胞，48h后采用间接免疫荧光的方法检测Ⅲ基因的瞬时表达蛋白情况。将质粒PCAGGS—HA、PCAGGS—optiHA以100μg／只的剂量，采用后腿肌肉多点注射的方式，免疫6-8周龄雌性BALB／c小鼠，同时设立空载体PCAGGS对照。共免疫3次，每次间隔2周，三免2周后对每组以10^3.87 EID50的A／Swine／Guangdong／1／01（H1N1）进行攻毒。采用ELISA、血凝抑制试验、细胞因子检测和肺组织病毒含量测定等实验评价这两种DNA疫苗的免疫效果。结果表明，HA基因密码子优化的DNA疫苗可显著提高体液免疫和细胞免疫的应答水平，攻毒后免疫组PCAGGS—optiHA的保护效力明显高于免疫组PCAGGS—HA。这一结果为进一步研究和设计有效的SIVDNA疫苗奠定了基础。
- 杨馥如于海王斌黄梦马继红周艳君童光志
- 关键词：猪流感病毒HA基因密码子优化
- 中国大陆猪流感病毒流行特征及未来值得关注的几个问题被引量：3
- 2012年
- 控制猪流感病毒(Swine influenza virus,SIV)的流行具有重要的兽医学和公共卫生学意义。中国被认为是国际流感病毒的流行中心,对流感病毒的流行生态有着重要影响。本文将对中国大陆SIV流行特征做一归纳,并简要分析未来值得关注的几个问题。
- 王斌童光志
- 关键词：猪流感病毒
- 通用型猪流感疫苗基础研究
- 目的：研制具有广谱交叉保护能力的通用型猪流感疫苗。方法：将H3亚型SIV HA共有序列进行优化并选取M2e和NP147-155，三者构建DNA疫苗，基因枪免疫小鼠。结果：其中一组只含有HA及M2e的DNA疫苗只能保护动物...
- 王斌于海杨馥如黄梦马继红亓文宝周艳君廖明童光志
- 关键词：免疫保护流感病毒免疫应答
- 宿主细胞erp57基因敲除抑制流感病毒复制的研究被引量：1
- 2016年
- ERp57是细胞内质网内的蛋白二硫键异构酶家族成员,可以催化蛋白二硫键的合成以促进蛋白折叠。为研究erp57基因敲除对流感病毒复制的影响,本研究通过CRISPR/Cas9技术构建了erp57基因的向导RNA(g RNA)敲除质粒p GEM-erp57g RNA,并将其与p Cas9-EGFP共转染至人肺腺癌细胞A549中,采用流式分选及限制性稀释的方法筛选单细胞克隆株,通过靶基因组测序及western blot检测,筛选获得了erp57基因敲除的A549细胞系。erp57基因敲除细胞系与野生型细胞生长动力学无显著差异。此外,将H1N1亚型流感病毒分别感染野生型和erp57基因敲除细胞系以测定erp57基因敲除对流感病毒复制水平的影响。结果显示流感病毒在erp57基因敲除细胞中的复制显著地受到了抑制,表明ERp57是流感病毒复制过程中的一个关键蛋白。本研究为开发新的抗流感病毒手段提供了相关的实验依据。
- 胡丹王斌冷有龙王玉杰于群郑永辉范春玲
- 关键词：基因敲除流感病毒
