李涛
- 作品数：13 被引量：37H指数：4
- 供职机构：福建农林大学更多>>
- 发文基金：福建省农业科技重点项目中央级公益性科研院所基本科研业务费专项更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生轻工技术与工程更多>>
- 肠炎沙门菌鞭毛蛋白的原核表达纯化及其多克隆抗体的制备被引量：4
- 2016年
- 利用PCR技术成功扩增到了肠炎沙门菌鞭毛蛋白fliC基因,将其连接到原核表达载体pET-32a(+)中,构建原核重组表达质粒pET-32a(+)-fliC。将pET-32a(+)-fliC转化到大肠杆菌BL21(DE3)菌株中,并在30℃下用终浓度为1mmol/L IPTG进行诱导表达9h。表达的重组蛋白通过镍离子亲和层析和分子筛的方法进行纯化,获得的蛋白用SDS-PAGE方法进行分析。对纯化的重组蛋白进行定量和内毒素测定后,用其免疫SPF鸡,制备超免疫血清。纯化的FliC蛋白与其受体之间的相互作用通过流式细胞仪进行分析。结果显示,成功扩增到了长度为1518bp的全长fliC基因,该基因编码的蛋白在30℃下以可溶性形式表达,经过镍离子亲和层析与分子筛的方法获得的FliC蛋白的纯度高,其内毒素的含量低于0.5EU/mL,并能够结合该蛋白在细胞上的受体。用纯化的重组蛋白免疫鸡获得的阳性血清的效价为1∶12 800。上述结果为进一步研究FliC蛋白的免疫学功能奠定了基础。
- 史冰田王高玲郭杰司微李涛王斌刘恒贵
- 关键词：肠炎沙门菌鞭毛蛋白原核表达阳性血清
- 犬细小病毒多重PCR检测方法的建立和临床应用被引量：2
- 2014年
- 犬细小病毒病是由犬细小病毒（Canine paryovir—us，CPV）引起的多发生于幼犬的致死性传染病，主要表现为出血性肠炎和心肌炎。CPV属于细小病毒科细小病毒属猫细小病毒亚群，其基因组为单股负链DNA。该病毒最早由美国学者A．K．Eugster等。
- 李涛王高玲王斌修金生胡崇伟马金友
- 关键词：犬细小病毒病PCR检测方法出血性肠炎心肌炎
- 猪嵴病毒实时荧光定量RT-PCR方法的建立被引量：9
- 2012年
- 目的本研究根据GenBank中登录猪嵴病毒(porcine kobuvirus,PKV)株的3D蛋白序列基因特征,设计特异性引物,建立基于SYBR GreenⅠ检测PKV的实时荧光定量RT-PCR方法。结果该方法检测PKV的3D基因在6.42×102～6.42×108拷贝/μL范围内有很好的线性关系,其扩增相关系数为0.999,扩增效率为100%,扩增产物的融解曲线分析只出现1个单特异峰,融解温度为(84.94±0.24)℃,对传染性胃肠炎病毒、猪轮状病毒、猪圆环病毒、猪繁殖与呼吸综合症病毒、猪伪狂犬病毒、猪瘟病毒均检测不到荧光信号,特异性强。所建立实时荧光定量RT-PCR方法组内变异系数为0.26%～1.14%,组间变异系数0.63%～1.79%,重复性好。结论本方法的建立为PKV的早期诊断及定量分析PKV感染水平和确定感染靶器官提供新的检测方法。
- 修金生陈小权王斌李涛
- 关键词：SYBR实时荧光定量RT-PCR
- 猪B7-H4的克隆鉴定与单克隆抗体制备
- B7家族分子是T细胞免疫应答的重要调控分子之一,在抗病毒和抗肿瘤免疫应答中发挥重要的免疫调节作用.B7-H4分子是新发现的B7家族成员之一,在人和小鼠中研究表明,它对T细胞免疫应答具有负调控功能.目的:克隆鉴定猪B7-H...
- 刘培欣李涛彭金美田志军刘恒贵
- 关键词：原核表达单克隆抗体
- hilA基因两端51bp序列对示踪标记性绿色荧光蛋白在禽肠炎沙门氏菌中倍增表达效率的鉴定被引量：2
- 2015年
- 为构建表达绿色荧光蛋白(GFP)作为示踪标记的重组禽肠炎沙门氏菌(S.enteritidis)并鉴定其遗传稳定性,本研究通过重叠延伸PCR构建5'端含有T7启动子和核糖体结合位点(RBS),3'端含有T7终止子序列的增强型GFP(e GFP)表达盒,并将e GFP表达盒插入p MD18-T载体中构建p MD-e GFP原核表达重组质粒,将其转化于S.enteritidis。结果显示e GFP能够在S.enteritidis中持续表达。进一步将S.enteritidis hil A基因两端的51 bp序列分别添加到p MD-e GFP中e GFP表达盒的两端,构建p MD-He GFP重组质粒。荧光显微镜观察和流式细胞仪分析与p MD-e GFP相比,p MD-He GFP转化S.enteritidis后,其e GFP的荧光强度提高约30倍。通过在无抗生素选择压力下连续传20代次,重组S.enteritidis中e GFP仍然能够稳定表达。本研究结果为进一步研究S.enteritidis在动物体内的分布和定植规律等提供了一种具有荧光示踪标记的目标菌,并为其他细菌的同类研究提供了借鉴。
- 王高玲李涛史冰田司微王斌刘恒贵
- 关键词：肠炎沙门氏菌绿色荧光蛋白荧光标记
- 抗新城疫病毒HN蛋白单链抗体的原核表达及其功能鉴定被引量：4
- 2014年
- 为制备抗鸡新城疫病毒(NDV)血凝素-神经氨酸酶(HN)单链抗体(scFv)并鉴定其生物学功能,本研究提取抗NDV HN单克隆抗体杂交瘤细胞株总RNA,通过RT-PCR扩增抗HN蛋白抗体的轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)编码序列,将其插入含有Linker序列的载体pET-scIG中,构建抗HN的scFv(HN-scFv)原核表达重组质粒pET-HN-scFv并在大肠杆菌中诱导表达。结果显示HN-scFv主要以包涵体形式存在。将包涵体进行复性和Ni-NTA层析柱纯化后用于流式细胞仪检测,结果显示复性纯化后的HN-scFv能够识别表达于293T细胞表面的NDV HN蛋白。该scFv的制备为进一步对该抗体进行改造奠定了基础。
- 王斌刘培欣李涛王高玲修金生胡崇伟刘恒贵
- 关键词：单链抗体新城疫病毒
- 基因Ⅶ型新城疫病毒HN蛋白线性主抗原区的分析及其应用研究
- 引言新城疫(Newcastle disease,ND)是由新城疫病毒(NDV)引起的禽类的一种急性、高度致死性传染病,在世界范围内严重危威胁养禽业的发展.NDV分为多个基因型,近年来在世界范围内流行的主要毒株是基因Ⅶ型N...
- 李涛刘培欣王高玲史冰田王斌司微修金生刘恒贵
- 犬细小病毒临床样品基因组快速分离方法
- 2012年
- 犬细小病毒是一种具有单链基因组DNA且没有囊膜的病毒,是引起幼犬出血性肠炎和心肌炎的高度接触传染性病原.研究采集疑似细小病毒感染病死犬的肠管和心脏等组织,通过组织匀浆的方法分离病毒,采用3种方法提取病毒基因组DNA.根据犬细小病毒基因序列设计特异性引物,采用PCR方法扩增病毒基因片段,琼脂糖凝胶电泳检验的扩增结果与预计结果完全一致.结果表明:CPV的分离和基因组DNA的提取方法可靠,为CPV的分离和检测及进一步研究奠定了基础.
- 马金友李涛于之清刘俊伟陈金山
- 关键词：犬细小病毒基因组DNA
- 重组牛白细胞介素-2的高效表达及其生物学活性的测定被引量：8
- 1998年
- 以ＰＣＲ方法扩增重组牛白细胞介素２基因，获得带有ＡＴＧ的完整牛白细胞介素２基因片段。以ｐＢＶ２２０为表达质粒，成功地构建了重组牛白细胞介素２的高效表达载体ｐＢＶｍＢｏＩＬ２，并转入Ｅ．ｃｏｌｉ。诱导表达结果表明，表达的重组牛白细胞介素２占总菌体蛋白的２２％以上，比原来提高２倍。活性测定结果表明，表达的重组牛白细胞介素２具有极显著的体外增殖活化淋巴细胞的活性，重组牛白细胞介素２的分子量约为１５４８８。
- 金红李祥瑞李涛于康震卢景良
- 关键词：白细胞介素2MTT比色法
- 基因Ⅶ型新城疫病毒(NDV)HN随机酵母展示文库的建立
- 病毒感染宿主后,病毒蛋白在体内可以诱导体液免疫应答,因此,揭示各种病原蛋白在体内诱导体液免疫应答的机制是病毒抗原学研究的重要内容之一.随着免疫技术的发展与应用,目前研究报道了多种研究抗原学的高通量技术,其中酵母展示表达技...
- 李涛刘培欣王斌刘怀然刘恒贵
