吴旭平
- 作品数：7 被引量：45H指数：3
- 供职机构：南京农业大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金江苏省自然科学基金更多>>
- 相关领域：环境科学与工程生物学医药卫生更多>>
- 甲基对硫磷水解酶参与催化相关结构的研究被引量：1
- 2005年
- 甲基对硫磷水解酶(MPH)是一种新的有机磷水解酶。将完整的甲基对硫磷水解酶基因(mpd)构建入pUC19载体,使得mpd基因以自身的启动子在EscherichiacoliDH5α中表达并得到了纯化。金属螯合实验发现MPH的活性不受金属螯合剂1,10菲啉的影响;但用电感耦合等离子发射光谱测定其金属含量显示MPH是金属酶,1mol酶中结合了2mol的Zn2+。为确定参与MPH催化活性的必需氨基酸,用化学修饰剂碳化二亚胺、二乙基焦磷酸酯、磷酸吡哆醛和丁二酮处理MPH,然后检测其残余酶活力,结果表明天冬氨酸、谷氨酸、赖氨酸和精氨酸残基与酶的催化活性无关;而二乙基焦磷酸酯对组氨酸侧链的化学修饰引起酶活性的大幅度的下降,其对酶活性的抑制率达到9.6h-1,说明组氨酸是酶活力所必需的基团。这些结果为进一步研究酶的结构及对酶进行分子改造提供了必要的基础数据。
- 吴旭平刘卫东曹慧李顺鹏崔中利
- 关键词：甲基对硫磷水解酶化学修饰必需氨基酸
- 污染土壤中有机磷农药降解菌的分离及其多样性被引量：22
- 2005年
- 采用添加有机磷农药的选择性培养基,在长期受有机磷农药污染的土壤中分离到7株有机磷农药降解菌,经生理生化鉴定和系统发育分析,菌株mp-1鉴定为Pseudaminobactersp.,菌株mp-2为Alcaligenessp.,菌株mp-7为Brucellasp.,其他菌株为Ochrobactrumsp.。16SrDNA序列同源性比较、系统发育分析和染色体ERIC-PCR指纹图谱扩增表明有机磷农药长期污染的土壤中有机磷农药降解菌具有丰富的多样性。
- 张瑞福吴旭平樊奔何健蒋建东李顺鹏
- 关键词：有机磷农药降解菌系统发育多样性
- 有机磷农药污染土壤中有机磷农药降解菌的分离与多样性研究
- 采用添加有机磷农药的选择性培养基,在有机磷农药长期污染的土壤中分离到七株有机磷农药降解菌,经生理生化鉴定和系统发育分析,菌株mp-1鉴定为Pseudaminobacter sp,菌株mp-2为Alcaligenes sp...
- 张瑞福吴旭平樊奔何健蒋建东李顺鹏
- 关键词：有机磷农药降解菌系统发育多样性
- 文献传递
- 一种检测乙肝病毒的试剂盒及乙肝病毒的检测方法
- 本发明涉及乙肝病毒检测技术领域，特别涉及一种检测乙肝病毒的试剂盒及其检测方法。本发明的试剂盒包括：脂质体‑QD复合物标记的报告探针，磁珠修饰的捕获探针和缓冲液；所述报告探针核酸序列和所述捕获探针核酸序列分别与乙肝病毒DN...
- 刘斐吴旭平李嘉豪
- 邻单胞菌M6甲基对硫磷水解酶催化特性的研究
- 甲基对硫磷水解酶(MPH)是一种新的有机磷水解酶。本研究将完整的甲基对硫磷水解酶基因(mpd)构建入pUC19载体，使得mpd基因以自身的启动子在EscherichiacoliDH5α中表达并通过DEAE-Sephade...
- 吴旭平
- 关键词：甲基对硫磷水解酶动力学参数定点突变底物特异性
- 文献传递
- 微生物降解有机磷类毒剂的酶学研究进展被引量：9
- 2004年
- 有机磷毒剂在农业生产和战争中的应用广泛 ,其生物解毒受到理论和应用研究方面的重视。有机磷水解酶在有机磷毒剂的生物降解中具有重要的作用 ,目前在有机磷水解酶的蛋白质晶体结构、酶促反应机制等方面的研究取得了较大的进展。文中对有机磷水解酶在酶学、高级结构、催化机制、定向进化及其应用等方面的研究进行了综述 。
- 傅国平崔中利吴旭平徐玮李顺鹏
- 关键词：有机磷水解酶定向进化
- 甲基对硫磷水解酶的重组表达及其纯化和性质研究被引量：14
- 2004年
- 用PCR方法获得甲基对硫磷水解酶编码基因 ,构建了重组表达质粒pET2 9a_mpd ,将其转化至EscherichiacoliBL2 1 (DE3)中 ,经IPTG诱导表达 ,得到C 末端含有 6个寡聚组氨酸的甲基对硫磷水解酶 ,用Ni NTA亲和层析纯化得到具有活性的甲基对硫磷水解酶。测定了环境因素对酶活性的影响及酶动力学参数。甲基对硫磷水解酶水解甲基对硫磷时 ,最适pH8 6～ 8 8,最佳反应温度 1 5℃ ;Mn2 + 、Zn2 + 、Cu2 + 可使酶活性增加 1 5 %～ 2 0 % ,Ca2 + 、Mg2 + 微弱地促进酶的作用 ,Ni2 + 对酶活性几乎无影响 ;1mmol LEDTA·Na2 + 几乎不影响酶的活性 ,而 1 0mmol LEDTA·Na2 + 对甲基对硫磷水解酶有较强的抑制作用。甲基对硫磷水解酶水解乙基对硫磷时 ,最适pH8 6。 2 5℃时 ,该酶对甲基对硫磷的米氏常数Km 为 (6 8 6± 5 1 ) μmol L ,kcat为 (4 5± 6 )S- 1 ;对乙基对硫磷的米氏常数Km 为 (5 9 5± 6 0 )μmol L ,kcat为 (8± 1 )S- 1 。kcat Km
- 傅国平崔中利徐玮吴旭平李顺鹏
- 关键词：甲基对硫磷水解酶基因表达酶活性
