罗莉
- 作品数：5 被引量：3H指数：1
- 供职机构：重庆医科大学附属第二医院更多>>
- 发文基金：重庆市卫生局医学科研项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- HBx基因缺失突变对HBV复制和转录的影响
- 2012年
- 目的构建HBx基因缺失突变质粒pUC-HBV1.0.X7,研究HBx缺失对HBV复制和转录的影响。方法以包含HBV全长基因组的野生型质粒pUC-HBV1.0为模板,用定点突变技术构建HBx基因缺失突变质粒pUC-HBV1.0.X7,并酶切和DNA测序鉴定。用SapⅠ单酶切这两种质粒,获得线性的野生型和HBx缺失突变型HBV基因组,经转染试剂PolyJetTMReagent介导分别瞬时转染到HepG2细胞中。在转染后各时间点Western blot检测HBx蛋白的表达,Southern blot和Real-time PCR同时检测细胞质DNA复制和细胞核cccDNA的合成,Real-time PCR分析定量HBV前基因组RNA(pgRNA)的转录。结果在野生组中可检测到HBx蛋白的表达,而在HBx突变组中HBx蛋白的表达低于Western blot的检测范围。两组中各时间点合成的cccDNA水平无统计学差异(P>0.05)。而在转染后96 hHBx突变组中细胞质DNA的复制和pgRNA的转录都分别比野生组减少50%～70%(P<0.05)。结论 HBx缺失虽然不影响细胞核HBV cccDNA的合成,但是它能下调细胞质HBV DNA的复制和pgRNA的转录。
- 罗莉何松郭进军雷宇罗娜龚倩
- 关键词：HBVX蛋白CCCDNA定点突变技术
- HBx基因缺失突变对HBV复制和转录的影响
- 目的 构建HBx 基因缺失突变质粒pUC-HBV1.0.X7,研究 HBx 缺失对HBV复制和转录的影响.方法 以包含HBV 全长基因组的野生型质粒pUC-HBV1.0 为模板,用定点突变技术构建HBx 基因缺失突变质粒...
- 罗莉何松郭进军雷宇罗娜龚倩
- 关键词：HBVXCCCDNA定点突变技术
- 乙型肝炎病毒X蛋白及其截短体与损伤DNA结合蛋白1在HBV复制中的作用被引量：1
- 2013年
- 目的探讨乙型肝炎病毒x蛋白（HBx）及其两个截短体（HBx、HBx43～154）与损伤DNA结合蛋白（DDB）1在HBV复制中的作用。方法用质粒瞬时转染HepG2细胞，72h后分别提取细胞总蛋白质和总RNA，通过Westernblot分析验证DDB1蛋白表达，逆转录实时定量PCR在基因的mRNA水平观察HBx蛋白及其截短体对DDB1蛋白表达的影响。提取转染72h后细胞胞质DNA，收集细胞的培养上清液，通过实时定量PCR及酶联免疫吸附试验检测各组细胞胞质HBVDNA复制及培养上清液中病毒标志物HBsAg、HBeAg表达水平，从而观察HBx蛋白及其两个截短体与DDB1对HBV复制的影响。对数据进行单因素方差分析及检验。结果在有HBV复制的HepG2细胞中，缺失HBx转染组细胞中DDB1蛋白在mRNA水平明显下降（相对表达水平为野生型转染组的52．74％±8．95％，f=9．143，P〈0．05），胞质DNA的复制及培养上清液中病毒标志物HBsAg、HBeAg表达水平也明显下降（相对表达水平分别为野生型转染组的55．49％±1．19％、48．05％±2．90％、46．22％±2．20％，P值均〈0．05）。共转染HBxN-端截短体HBx4。后细胞中DDB1蛋白mRNA水平恢复到野生型水平，且能使缺失HBx蛋白的HepG2细胞中胞质HBVDNA的复制及培养上清液中病毒标志物HBsAg、HBeAg的表达恢复到野生型水平。但共转染HBxC-端截短体HBx的细胞中DDB1蛋白在mRNA水平较野生组明显下降（相对表达水平为野生型转染组的59．95％±9．09％，f=7．629，P〈0．05），且不能使转染缺失HBx蛋白的HepG2细胞中胞质HBVDNA的复制及培养上清液中病毒标志物HBsAg、HBeAg的表达恢复到野生型水平（相对表达水平分别为野生型转染组的62．53％±0．67％、63．13％±2．14／0、55．40％±0．99％，P值均〈0．05）。并且各转染组DDB1蛋白mRNA水平变化与胞质HBVDNA复制和培养上清液中病毒标志物HBsAg、HBeAg表达水平是一致的。结论C-�
- 杨旋何松罗娜罗莉樊浩龚倩
- 关键词：肝炎病毒乙型乙型
- 乙型肝炎病毒Ⅹ蛋白对原代小鼠肝细胞周期的影响被引量：2
- 2012年
- 目的探讨HBV复制过程中HBx蛋白对原代小鼠肝细胞周期的影响。方法采用原代小鼠肝细胞为研究系统，用野生型HBV质粒（pHBV）和HBx蛋白表达缺失的HBV质粒（pHBV△X）分别转染细胞。Westernblot检测细胞周期蛋白cyclinD1、cyclin E、cyclinA及细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子p16（p16）、p21的表达水平l实时荧光定量PCR和Southernblot检测HBVDNA复制水平。两组之间比较用两样本均数f检验，多样本均数间的比较用方差分析及q检验。结果新分离肝细胞和原代培养24、48、72h肝细胞的细胞周期蛋白表达水平无明显差异；转染48h后，pHBV组细胞与pHBV△X组细胞周期蛋白条带灰度值相比，前者cyclinD1、p21、cyclinE表达量较高，p16的表达量较低，统计量t值分别为15．713，22．897，14．680，-19．584，P值均〈0．05。培养72h后提取HBVDNA，Southernblot检测HBVDNA复制中间体松散环状DNA、双链线性DNA、单链DNA的水平，经条带灰度扫描，pHBV组的水平（分别为3288．336±448．011、6458．318±182．163、2760．613±393．561）明显高于pHBV△X组（分别为515．721±62．530、2122．228±28．347、1632．013±207．021）及空白对照组，P值均〈0．05 实时荧光定量PCR检测HBVDNA复制水平，pHBV组【每个细胞（987．50±47．80）拷贝】也明显高于pHBVAX组【每个细胞（303．67±33．94）拷贝】，t=20．203，P〈0．05。结论HBx蛋白能通过调节细胞周期中各蛋白的表达，使细胞由静止期（G0）进入DNA合成前期（G1）并停滞于G1期，从而促进HBV的复制。
- 蔡园何松罗娜罗莉龚倩
- 关键词：肝炎病毒乙型转染小鼠细胞周期蛋白质类HBX蛋白
- HBx基因缺失突变对乙型肝炎病毒复制和转录的影响
- 目的：构建HBx基因缺失突变质粒pUC-HBV1.0.X7，研究HBx缺失对HBV复制和转录的影响。方法：以包含HBV全长基因组的野生型质粒pUC-HBV1.0为模板，用定点突变技术构建HBx基因缺失突变质粒pUC-HB...
- 罗莉何松郭进军罗娜龚倩雷宇
- 关键词：乙型肝炎病毒定点突变技术
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