焦小玲
- 作品数：6 被引量：11H指数：2
- 供职机构：北京生物制品研究所有限责任公司更多>>
- 发文基金：“重大新药创制”科技重大专项国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学理学更多>>
- 制备疫苗用W135/Y群脑膜炎球菌菌种的免疫原性及遗传稳定性观察
- 2010年
- 目的 为保证生产四价流脑（A、C、W135、Y群）结合疫苗质量一致性和可控性,对分离自国内的W135、Y群脑膜炎球菌CMCC（B）29037株和CMCC（B）29028株进行免疫原性及遗传稳定性观察.方法 将W135/Y群脑膜炎球菌工作种子批菌种分别连续传代至30代,并收获3、5、10、15、20、25及30代次菌液,对各代次菌进行免疫原性、抗原性、生化反应、毒性、毒力测定,并将30代次菌发酵培养后提取荚膜多糖进行质量分析.结果 CMCC（B）29037株和CMCC（B）29028株工作种子批菌种诱导小鼠产生总IgG抗体分别为1∶1114和1∶2229,杀菌抗体水平与IgG抗体间差异无统计学意义;试管凝集效价均达到1∶320,生化检定两菌株均发酵葡萄糖、麦芽糖,不发酵果糖、蔗糖、甘露醇和乳糖;两菌株的LD50均＞109,30代次内各代次菌的免疫原性、抗原性、生化反应和毒性均无差异.30代次菌液脑腔毒性测定显示均无病理改变,用第30代次菌生产的W135/Y群脑膜炎球菌荚膜多糖各项检定指标均合格.结论 分离自国内的CMCC（B）29037株和CMCC（B）29028株为脑膜炎球菌W135/Y群菌株,免疫原性、抗原性好,生化反应合格、安全性良好,连续传至30代次仍保持较好的安全性和免疫原性,30代次菌纯化的W135/Y群脑膜炎球菌荚膜多糖质量符合质控要求,可以用作四价流脑结合疫苗生产株.
- 刘钰刘梅影王义萍陈敬张燕斌王平王雪薇林海涛焦小玲李冶珊焦梦
- 关键词：血清学试验生化反应荚膜多糖
- Y群脑膜炎球菌多糖活化工艺的优化被引量：3
- 2010年
- 目的优化Y群脑膜炎球菌多糖活化工艺,为A、C、W135、Y群脑膜炎球菌结合疫苗的研制奠定基础。方法分别以多糖衍化率和游离多糖含量为指标,按照三因素三水平正交试验,以不同的pH值、活化时间和活化剂加量对多糖进行活化后,与破伤风类毒素(TT)偶联,并经Sepharose4FF层析纯化后,对多糖-TT结合物进行各项生化检定、免疫原性检测及稳定性观察,确定最佳活化工艺,并对优化的工艺进行验证。结果以多糖衍化率为指标,可确定pH值和活化剂加量二因素对Y群脑膜炎球菌多糖的活化有显著影响(P<0.05),而以游离多糖为指标时,无法确定三因素对多糖的活化有显著影响(P>0.05),结合各项指标检测及稳定性观察结果 ,确定多糖活化最佳工艺为:在pH12条件下,向每mg多糖中加入等量活化剂,反应10min。采用优化的多糖活化工艺制备3批Y群脑膜炎球菌多糖-TT结合物,各项指标均符合多糖结合疫苗的常规质控标准。结论优化的多糖活化工艺可制备出游离多糖含量低、免疫原性高的Y群脑膜炎球菌多糖蛋白结合物,结果具有重复性。
- 刘梅影陈敬刘钰李冶珊林海涛张燕斌王平王雪薇焦小玲王义萍
- 关键词：活化免疫原性
- 脑膜炎球菌多糖蛋白结合疫苗中A群游离多糖含量测定方法的建立
- 2014年
- 目的建立脑膜炎球菌结合疫苗中A群游离多糖含量的定量检测方法,并进行验证。方法采用高效阴离子色谱-电导法（high-performance anion-exchange chromatography with conductivity detection,HPAEC-CD）,分析柱：IonPacTMAS11 Analytical（4 mm×250 mm）,22 mmol/L Na OH流洗,流速为1 ml/min,25μl自动进样,电导检测。筛选样品的氧化反应最佳温度、双氧水浓度及干烤时间,确定HPAEC-CD的检测限和定量限,并进行专属性、准确性及精密度验证。应用建立的方法检测3批多糖蛋白结合物原液A-破伤风类毒素（A-tetanus toxoid,A-TT）多糖及游离多糖含量,并与《中国药典》三部（2010版）附录ⅦA磷测定法中的传统比色法进行比较;同时检测3批A、C群及A、C、W135、Y群脑膜炎球菌多糖蛋白结合疫苗的多糖及游离多糖含量。结果确定样品的氧化条件为：100μl/ml H2O2,220℃干烤90 min。磷标准品在0.1-1μg/ml范围内,峰面积和浓度线性关系良好（r=0.999 877）;TT、C-TT、W-TT及Y-TT对测定无干扰;该方法的检测限为0.007μg/ml,定量限为0.024μg/ml;A群脑膜炎球菌多糖原液的加样回收率在97.56%-102.95%之间;重复性及不同操作者间的精密度试验结果 RSD均小于5%。A-TT的多糖含量及游离多糖含量与传统比色法测定结果差异较小;3批A、C群及A、C、W135、Y群脑膜炎球菌多糖蛋白结合疫苗的多糖含量均符合《A、C群脑膜炎球菌结合疫苗制造及检定规程草案》及《A、C、W135、Y群脑膜炎球菌结合疫苗制造及检定规程草案》要求,游离多糖含量分别为24.31%、23.04%、24.44%和19.07%、17.80%、19.46%。结论采用H2O2氧化处理,HPAEC-CD检测,除了能对脑膜炎球菌多糖蛋白结合疫苗中微量A群多糖含量进行定量检测外,还能够进行游离多糖含量的检测。该方法灵敏度和精密度良好,操作简单、安全,对操作者及环境提供了保护。
- 王平林海涛焦小玲刘梅影
- 关键词：脑膜炎奈瑟菌结合疫苗
- 6株金黄色葡萄球菌菌株的鉴定被引量：5
- 2014年
- 目的对6株金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus,S.aureus,简称金葡菌）菌株进行鉴定,为研制相关疫苗提供参考。方法将稀释的6株疫苗研制用备选金葡菌菌株49521、12602、49525、12605、55804、10832及质控菌株25923、12228菌悬液划线接种TSA平板及Columbia血平板,观察菌落形态,并涂片染色镜检;利用API Staph生化试剂盒、staphylase test血浆凝固酶检测试剂盒及30μg头孢西丁药敏纸片对菌株进行鉴定;利用PCR法鉴定菌株16S r RNA基因、荚膜基因型及mec A基因;用系列稀释的菌悬液经腹腔注射BALB/c小鼠,初步测定菌株毒力。结果6株金葡菌经平板培养,可见圆形、凸起、不透明、有光泽的菌落,Columbia血平板培养的菌落周围可见透明溶血环,镜检结果为革兰阳性球菌,呈单、双或葡萄串状排列。6株菌株的生化反应结果相同,且与质控菌株25923反应结果一致;6株菌株的凝固酶试验结果均为阳性,均对头孢西丁敏感,均未扩增出mec A基因片段,为甲氧西林敏感菌株（methicillin sensitive Staphylococcus aureus,MSSA）。6株菌株均扩增出1 544 bp的16S r RNA基因片段,与Gen Bank中的参考序列NR_075000.1的同源性均为99%;菌株49521、12605、55804、10832均扩增出340 bp的cap5基因片段,与Gen Bank中序列U81973.1的同源性为99%-100%;菌株12602、49525均扩增出171 bp的cap8基因片段,与Gen Bank中序列U73374.1的同源性均为100%。6株菌株的半数致死量（LD50）均在2.5×10^8-2.5×10^9 CFU之间。结论对6株疫苗研制用备选金葡菌进行了鉴定,为疫苗研制中菌株鉴定及不同荚膜型菌株的选择提供了参考。
- 郭京蓉袁玉兰周继唯林海涛焦小玲
- 关键词：金黄色葡萄球菌毒力
- 层析法纯化C群脑膜炎球菌多糖及其制备的多糖蛋白结合物的安全性和免疫原性被引量：1
- 2013年
- 目的采用层析法纯化C群脑膜炎球菌多糖,以替代冷酚抽提法,并对制备的多糖蛋白结合物进行初步安全性和免疫原性评价。方法采用温和的表面活性剂去氧胆酸钠对C群脑膜炎球菌多糖进行前处理,并用Capto adhere和Capto DEAE阴离子交换凝胶柱串联,对多糖进行柱层析纯化,再通过脱盐去除残留的去氧胆酸钠,获得精制多糖。对缓冲液中的去氧胆酸钠浓度、缓冲液pH值、样品的前处理时间及离子交换流速进行优化,并对建立的层析纯化工艺进行放大,纯化3批多糖,按照《中国药典》三部(2010版)要求检测各项质控指标,并通过核磁共振-氢谱检测纯化后的多糖结构。将层析法和苯酚法纯化的多糖分别与破伤风类毒素结合,制备多糖蛋白结合物,对结合物进行异常毒性、小鼠急性毒性试验和免疫原性检测。结果经优化,确定缓冲液的去氧胆酸钠浓度为1.0%,pH值为8.0,样品前处理时间为6 h,离子交换流速为2.0 ml/min。放大工艺制备的3批C群脑膜炎球菌多糖各项检测指标均合格,多糖回收率均大于70%,明显高于苯酚法制备的多糖。核磁共振-氢谱显示,层析法与苯酚法纯化的多糖主要峰基本一致,层析法未改变多糖结构。层析法纯化的多糖制备的多糖蛋白结合物异常毒性试验合格,小鼠急性毒性试验结果与苯酚法纯化多糖制备的多糖蛋白结合物比较,差异无统计学意义(P>0.05),免疫小鼠后均具有良好的免疫原性。结论层析法分离杂蛋白操作简便,省时省力,工艺易于放大,且减少了对环境的污染,可替代苯酚抽提法用于C群脑膜炎球菌多糖的纯化。
- 王雪薇刘钰陈敬焦小玲王平张燕斌林海涛刘梅影
- 关键词：C群脑膜炎球菌多糖结合物安全性免疫原性
- 高效阴离子色谱-脉冲安培检测法测定脑膜炎球菌结合疫苗中A群多糖含量被引量：2
- 2014年
- 目的：采用高效阴离子交换色谱-脉冲安培检测法（HPAEC-PAD）测定A群脑膜炎球菌多糖及脑膜炎球菌多糖蛋白结合疫苗中6-磷酸甘露糖胺的含量，并对该方法进行验证，实现微量A群脑膜炎球菌多糖的定量检测。方法：A群脑膜炎球菌多糖酸水解处理后，经^1H、^13C NMR及COSY谱图分析，产物结构为6-磷酸甘露糖胺单体，然后进样CarboPac PA10柱，氢氧化钠-醋酸钠梯度洗脱，脉冲安培检测。筛选样品的水解条件;对HPAEC-PAD法进行专属性、精密度及准确性验证，并进行初步应用。结果：确定样品的水解条件为2 mol·L^-1三氟乙酸煮沸5 h。 载体蛋白破伤风类毒素对检测无干扰；在1～10 μg·mL^-1范围内，标准曲线线性关系良好（r 〉 0.999），加样回收率在95.73%～102.4%之间;试验内和试验间精密度试验结果RSD小于5%。 HPAEC-PAD法测定疫苗原液的多糖含量与Chen法比色测定结果相当，成品疫苗的A群多糖含量测定符合《A、C群脑膜炎球菌结合疫苗制造及检定规程草案》（每剂均≥10 μg）和《A、C、W135、Y群脑膜炎球菌结合疫苗制造及检定规程草案》（每剂均≥4 μg）。结论：HPAEC-PAD法专属性、精密度和准确性良好，可用于A群脑膜炎球菌多糖含量测定，尤其是脑膜炎球菌结合疫苗中A群多糖含量测定。
- 王平林海涛张燕斌焦小玲王雪薇刘梅影
- 关键词：脑膜炎球菌结合疫苗
