李佳禾
- 作品数：14 被引量：76H指数：5
- 供职机构：中国农业大学动物医学院更多>>
- 发文基金：农业部动物疫情监测与防治项目国家大学生创新性实验计划公益性行业(农业)科研专项更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 牛支原体表达载体的构建
- 牛支原体是导致牛的多种疾病综合症的病原体之一,并给养牛业带来了严重的经济损失。但是,由于缺乏有效的基因操作工具,关于牛支原体的致病机理的研究相对较少。作为功能性的DNA复制起始元件,oriC基因序列已经在多种支原体中得到...
- 李佳禾
- 关键词：牛支原体ORIC质粒基因表达
- 一种猪胸膜肺炎放线杆菌检测试剂盒及其应用
- 本发明公开了一种猪胸膜肺炎放线杆菌检测试剂盒及其应用。本发明提供的试剂盒，包括三对引物，即与猪胸膜肺炎放线杆菌Gen Bank Accession Number AF021919序列中3'端1000bp基因结合的内侧引物...
- 吴文学李佳禾张跃伟李旭妮黄书林
- 文献传递
- 环介导等温扩增技术快速检测猪细小病毒的试验被引量：6
- 2011年
- 利用环介导等温核酸扩增技术(LAMP),建立了一种灵敏、特异、快速的猪细小病毒(PPV)检测方法。该方法针对猪细小病毒非结构蛋白(NS-1)基因保守区域设计6条特异引物,在63℃的等温条件下45min即可完成反应。最低检测限量为10拷贝的PPV目的基因,比常规聚合酶链式反应(PCR)方法敏感100倍,并具有良好的特异性。以钙黄绿素和Mn2+作为荧光指示剂,可快速、直观判定反应结果。通过对149份临床样品进行检测比较,LAMP与PCR检出阳性样本数分别为33份和27份,表明LAMP方法阳性检出率高于PCR。
- 黄书林付萍李佳禾张跃伟蒋菲张侃陈会玲吴文学
- 关键词：PCR
- 牛支原体等温扩增冻干试剂盒研究被引量：4
- 2016年
- 【目的】牛支原体(Mycoplasma bovis)是导致牛多种疾病综合征的病原体之一,在世界范围广泛流行。为了有效监测此病在中国的流行情况,迫切需要敏感、便捷的诊断试剂产品。【方法】通过构建含有牛支原体uvrC基因片段的重组质粒并转化TOP10感受态细胞,获得重组大肠杆菌rP-uvrC。重组大肠杆菌大量表达并提取重组质粒后,获得质粒浓度为10~4拷贝/μL的溶液,作为质控用阳性对照品。根据文献报道的浓度配制甜菜碱溶液和显色液(主成份为SYBR Green I和HNB),分别作为冻干品溶解用溶液和等温扩增产物显色溶液。在已建立的牛支原体环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)检测技术的基础上配制等温扩增试剂,并通过考察等温扩增反应情况在常用的8种冻干疫苗耐热保护剂中选择对等温扩增反应没有影响的3种冻干保护剂,每种保护剂分别选用3种不同的浓度,共设计27种保护剂组方,通过观察冻干品物理性状选择最佳的一组保护剂配制冻干用等温扩增试剂,放到冻干机中测定共晶点,并优化一次干燥升温时间、干燥时间和二次干燥时间。通过对冻干制品物理性状的检验、真空度的检测以及残余水分含量的测定,筛选出一条适合等温扩增试剂的冻干曲线,并以此制备等温扩增试剂冻干品。取一定量等温扩增试剂冻干品、甜菜碱溶液、阳性对照品溶液和显色液,组装成试剂盒。利用6个浓度梯度(10~0-10~5个拷贝)重组质粒溶液检测试剂盒的敏感性,利用浓度为10~4 CCU·mL^(-1)的PG-45株、HB-1株、SD-2株牛支原体菌液、10~8CCU·mL^(-1)的牛鼻支原体和无乳支原体菌液、10~8CFU·mL^(-1)的多杀性巴氏杆菌和结核分枝杆菌,检测试剂盒的特异性。另外,将等温扩增冻干试剂盒分别置于不同温度下保存,检测其稳定性。【结果】8种冻干保护剂中只有海藻糖、甘露醇和牛血清白蛋白不影响
- 吴彤刘旭李佳禾闫新博张宁吴文学
- 关键词：牛支原体冻干试剂盒RT-PCR
- 一种猪繁殖与呼吸综合征病毒检测试剂盒及其应用
- 本发明公开了一种猪繁殖与呼吸综合征病毒检测试剂盒及其应用。本发明提供的试剂盒，包括三对引物，即与猪繁殖与呼吸综合征病毒Gen Bank Accession NumberU87392中MN基因结合的内侧引物对、外侧引物对和...
- 吴文学张跃伟李旭妮李佳禾
- 文献传递
- 一种猪繁殖与呼吸综合征病毒检测试剂盒及其应用
- 本发明公开了一种猪繁殖与呼吸综合征病毒检测试剂盒及其应用。本发明提供的试剂盒，包括三对引物，即与猪繁殖与呼吸综合征病毒Gen Bank Accession NumberU87392中MN基因结合的内侧引物对、外侧引物对和...
- 吴文学张跃伟李旭妮李佳禾
- 文献传递
- 猪胸膜肺炎放线杆菌环介导等温扩增检测方法的建立与应用
- 了敏感、特异的猪胸膜肺炎放线杆菌环介导等温扩增检测方法.敏感性是PCR方法的10倍.通过对18种病原微生物的检测,证明该法具有很强的种特异性.对实验感染猪和临床发病猪进行检测,发现该法对猪胸膜肺炎放线杆菌的检出率明显优于...
- 李佳禾
- 关键词：环介导等温扩增猪胸膜肺炎放线杆菌PCR
- 一种猪胸膜肺炎放线杆菌检测试剂盒及其应用
- 本发明公开了一种猪胸膜肺炎放线杆菌检测试剂盒及其应用。本发明提供的试剂盒，包括三对引物，即与猪胸膜肺炎放线杆菌Gen Bank Accession Number AF021919序列中3’端1000bp基因结合的内侧引物...
- 吴文学李佳禾张跃伟李旭妮黄书林
- 文献传递
- 一种猪细小病毒检测试剂盒及其应用
- 本发明公开了一种猪细小病毒检测试剂盒及其应用。本发明提供的试剂盒，包括三对引物，即与猪细小病毒的基因组DNA(GenBank Accession Number NC-001718)中NS1基因结合的内侧引物对、外侧引物对...
- 吴文学黄书林李佳禾
- 文献传递
- 一种猪细小病毒检测试剂盒及其应用
- 本发明公开了一种猪细小病毒检测试剂盒及其应用。本发明提供的试剂盒，包括三对引物，即与猪细小病毒的基因组DNA(GenBank Accession Number NC-001718)中NS1基因结合的内侧引物对、外侧引物对...
- 吴文学黄书林李佳禾
