李树玲
- 作品数：3 被引量：0H指数：0
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- 伯氏疟原虫顶端膜抗原1胞外区及其亚区的表达与免疫保护作用分析
- 2007年
- 目的表达伯氏疟原虫顶端膜抗原1(PbAMA-1)胞外区E及其各亚区,分析其免疫原性和免疫保护作用。方法抽提伯氏疟原虫基因组,对PbAMA-1基因测序,依据该序列采用毕赤酵母密码子使用频率重新设计PbA-MA-1基因序列。将其胞外区E分为3个彼此重叠的基因片段DⅠ、DⅡ和DⅢ并进行优化,人工合成后在大肠埃希菌中诱导表达。表达产物经纯化和重折叠,分别与福氏佐剂乳化后免疫小鼠和家兔,均免疫3次,间隔2周。每次免疫剂量,小鼠为20$g,家兔为100$g。ELISA检测抗体效价,并以疟原虫攻击实验确定各抗原的免疫保护效果。结果测得的PbAMA-1基因序列与Sanger测序中心公布的序列完全一致。密码子优化并人工合成的DⅠ、DⅡ、DⅢ和E目的基因片段在大肠埃希菌表达载体pET32a均获得诱导表达,经十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析,各目的基因表达产物大小与预计的相对分子质量Mr 44 300、Mr 33 300、Mr 29 900和Mr 67 200相一致。表达产物经镍离子螯合柱(Ni-NTA柱)纯化和谷胱甘肽(GSH)氧化还原法体外重折叠,蛋白纯度达90%以上,各纯化的重组蛋白在小鼠体内均激发产生高滴度抗体。其中,完整的胞外区E第3次免疫后抗体滴度为(34.4±0.15)×10-4,与其他组相比,免疫原性较其他各亚区更强(t=5.66,P<0.01;t=2.27,P<0.05和t=5.05,P<0.01)。取家兔免疫血清与感染伯氏疟原虫ANKA株的小鼠血膜抗原片进行间接荧光抗体试验(IFAT),均为阳性,其中抗E的抗血清免疫荧光强度最高,与ELISA检测的抗体水平一致。取家兔抗血清对小鼠伯氏疟原虫粗提抗原进行蛋白质印迹(Western blot)分析,产生特异性反应条带,表明能够识别天然的PbAMA-1蛋白。免疫小鼠在以伯氏疟原虫攻击实验中得到部分保护,DⅠ、DⅡ、DⅢ和E各免疫组小鼠与佐剂对照组相比,存活时间明显延长(t=2.78,P<0.05;t=2.67,P<0.05;t=3.46,P<0.01和t=3.50,P<0.01)。结论�
- 李树玲张冬梅曹毅潘卫庆
- 关键词：伯氏疟原虫顶端膜抗原1免疫原性
- 转基因伯氏疟原虫的建立及报告基因表达的初步研究
- 2004年
- 目的 :通过转染含有绿色荧光蛋白 (GFP)和 Pbf MSP1片段的重组质粒 ,建立伯氏疟原虫转染技术和表达恶性疟原虫 MSP- 1 1 90 0 0片段 (Pf MSP1 - 1 9)的转基因伯氏疟原虫。方法 :构建重组转染质粒 Pyr Flu/Pbf MSP1。伯氏疟原虫 ANKA株经培养和分离后用电转化方法转入重组转染质粒 ,药物筛选转化原虫后进行 PCR检测 ,并于荧光显微镜下检测报告基因GFP的表达。结果 :构建了重组转染质粒 Pyr Flu/Pbf MSP1。荧光显微镜下观察到呈绿色荧光的伯氏疟原虫。PCR检测显示转染伯氏疟原虫存在 GFP和 Pbf MSP1基因。结论 :重组质粒已成功转染伯氏疟原虫并表达了 GFP报告基因 。
- 曹毅张冬梅李树玲潘卫庆
- 关键词：转基因伯氏疟原虫基因表达绿色荧光蛋白
- 疟原虫裂殖子顶端膜抗原1（AMA-1）免疫保护功能域的分析
- 疟疾目前仍然是严重威胁人类健康的热带传染病。由于疟原虫抗药性以及蚊媒抗杀虫剂的抗性产生并广泛传播，使传统的疟疾防治方法面临严重困难。研制有效的疟疾疫苗被认为是疟疾防治的重要途径。 本研究重新设计并合成了PbAMA-1胞...
- 李树玲
- 关键词：疟疾疫苗毕氏酵母膜抗原免疫保护
- 文献传递
