金一帮 作品数:7 被引量:9 H指数:2 供职机构: 新疆医科大学第一附属医院 更多>> 发文基金: 新疆维吾尔自治区自然科学基金 国家自然科学基金 新疆维吾尔自治区高技术研究发展计划项目 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 更多>>
E.g抗原B对体外培养脾细胞及PBMC中Th17细胞比例及其IL-17表达影响的研究 目的:观察细粒棘球蚴囊液粗抗原对体外培养BALB/c小鼠脾细胞白介素(IL)-17和Smad2基因表达的影响;观察细粒棘球蚴抗原B(AgB)对体外培养人外周血单个核细胞(PBMC)中Th17细胞的影响。 方法:网搓法分... 金一帮关键词:脾细胞 白介素17 免疫逃避机制 文献传递 小鼠beta-防御素2真核表达载体的构建及表达 被引量:1 2011年 构建小鼠beta-防御素2(murie beta-defensin 2,mBD2)的真核表达载体pcDNA-mBD2,并观察其在真核细胞中的表达。从小鼠肝组织中提取mRNA通过逆转录聚合酶链反应扩增得到mBD2基因,定向克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+)获得pcDNA-mBD2;经酶切和测序鉴定构建正确,应用脂质体法转染siha细胞,并通过蛋白免疫印迹法检测细胞内mBD2的表达。结果显示,构建了小鼠mBD2的真核表达载体,转染siha细胞培养并采用G418稳定筛选后,获得稳定转染细胞,收集并裂解转染细胞,蛋白免疫印迹法检测到转染细胞内mBD2的表达。成功构建了真核表达载体pcDNA-mBD2,为研究mBD2在宫颈癌发生发展过程中的作用及作用机制奠定基础。 魏晓丽 温浩 金一帮 蒋中华 李明远关键词:真核表达 逆转录聚合酶链反应 蛋白免疫印迹 细粒棘球蚴抗原B对体外培养人外周血单个核细胞中Th17细胞的影响 被引量:1 2012年 目的观察细粒棘球蚴抗原B(AgB)对体外培养人外周血单个核细胞(PBMC)中CD4+IL-17+T细胞(Th17)细胞的影响。方法Ficoll法分离健康人群外周血中的PBMC并接种于24孔培养板,分为阴性对照组、低剂量抗原B(2mg/L)实验组和高剂量抗原B实验组(5mg/L)进行培养。分别在培养96、120和144h后取样,通过流式细胞术(FCM)检测培养液中Th17细胞的阳性表达率。所得结果采用两组配对t检验。结果Th17细胞的阳性表达率存低剂量和高剂量抗原B干预培养96h后分别为0.433±50.115和0.500±0.265,较阴性对照组1.067±0.473均降低,差异有统计学意义(P〈0.05),而在120h和144h虽有降低趋势,但差异无统计学意义(P〉0.05)。结论细粒棘球蚴抗原B对健康人外周血单个核细胞中Th17细胞的表达具有抑制作用,它可能与细粒棘球蚴所致免疫逃避机制有关。 金一帮 周洋 王俊华 吐尔洪江·吐逊 张雪 温浩关键词:细粒棘球蚴 抗原B 外周血 单核细胞 TH17细胞 小鼠beta防御素2原核表达与抗菌作用的初步研究 2012年 构建小鼠β-防御素-2(mouse beta defensins 2,mBD2)原核表达质粒pET32/mBD2,进行蛋白诱导表达及纯化,测定并纯化蛋白的抗菌活性。旨在为进一步研究其生物学特性奠定基础。通过腹腔注射脂多糖(lipopoly-saccharide,LPS)建立小鼠急性时相反应,采用RT-PCR方法扩增mBD2成熟肽,经KpnI和XhoI双酶切后插入相同酶切的pET-32a(+)载体,构建的重组质粒。将鉴定正确的重组质粒转化大肠杆菌表达菌株BL21(DE3),采用异丙基-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导融合蛋白的表达。通过镍亲和层析获得纯化的融合蛋白。将融合蛋白采用肠激酶酶切、洗脱并用滤纸片法测定目的蛋白的抗菌活性。成功构建了原核表达质粒pET32a(+)/mBD2,并转化工程菌BL21(DE3)。在0.25 mmol/L IPTG、30℃诱导4 h条件下获得的融合蛋白。采用抑菌试验证实蛋白具有一定的抑制革兰阳性菌及阴性菌生长的作用。本研究成功构建了pET32/mBD2原核表达质粒,得到了在大肠杆菌中稳定表达mBD2蛋白。 魏晓丽 金一帮 朱明 李亮 温浩关键词:原核表达 SDS-PAGE 抑菌作用 棘球蚴囊液对小鼠脾细胞IL-17及Smad2表达的影响 被引量:2 2011年 目的:观察细粒棘球蚴囊液对体外培养BALB/c小鼠脾细胞白介素(IL)-17和Smad2基因表达的影响。方法:制备小鼠脾细胞悬液,接种于48孔培养板中进行培养,以不加任何干预为对照组,囊液处理组为实验组。定时取样提取总RNA,经反转录成cDNA后用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测IL-17和Smad2基因的表达。结果:小鼠脾细胞IL-17表达在囊液处理6h和12h后升高(1.000±0.207 VS 3.672±0.746和1.000±0.154 VS 5.525±0.843),差异有统计学意义(P<0.05);小鼠脾细胞Smad2表达在培养1h后升高(1.000±0.077 VS 2.069±0.098)在12h后降低(1.000±0.110 VS 0.247±0.011),差异有统计学意义(P<0.05);协同分析发现IL-17基因与Smad2基因的表达变化呈现负相关(P<0.01),相关系数r=-1。结论:细粒棘球蚴囊液对小鼠脾细胞IL-17和Smad2基因的表达具有上调作用,推测其可能与宿主抗棘球蚴感染的机制有关。 金一帮 周洋 王俊华 吐尔洪江.吐逊 魏晓丽新疆医科大学第一附属医院新疆包虫病基础医学重点实验室 张志 张传山新疆医科大学第一附属医院新疆包虫病基础医学重点实验室 李亮新疆医科大学第一附属医院新疆包虫病基础医学重点实验室 林仁勇新疆医科大学第一附属医院新疆包虫病基础医学重点实验室 温浩关键词:棘球蚴 囊液 脾细胞 白介素17 SMAD2 PD-L1与记忆性T细胞在肝囊型包虫病患者CD4^+T淋巴细胞中的表达及意义 2011年 目的检测程序性死亡受体配体-1(PD-L1)及记忆性T细胞在肝囊型包虫病患者CD4+T淋巴细胞中的表达,探讨其在细粒棘球蚴感染免疫逃避中的作用。方法具有包虫活性的肝包虫病患者42例,健康对照20例,取血,分离PBMC,流式细胞术检测PD-L1(CD274+)、CD45RO+及CD4+CD45RO+CD274+细胞比例,并分析PD-L1与CD45RO的相关性。结果肝囊型包虫病患者PBMC中PD-L1、CD45RO+及CD4+CD45RO+CD274+细胞比例均显著高于健康对照组(P<0.05);肝囊型包虫病患者的PD-L1与CD45RO呈显著正相关(P<0.05),健康对照组二者无显著相关关系(P>0.05)。结论在肝囊型包虫病患者的免疫反应中,PD-L1可能通过记忆性T淋巴细胞发挥促进包虫免疫逃避的作用。 巫姜 李涛 张志 董瑞强 周洋 金一帮 林仁勇 温浩关键词:细粒棘球蚴病 PD-L1 CD4+ 细粒棘球蚴囊液对体外培养小鼠脾细胞Foxp3及Smad4基因表达的影响 被引量:7 2011年 目的观察细粒棘球蚴囊液对体外培养BABL/c小鼠脾脏细胞中调节性T细胞(Treg细胞)相对特异分子Foxp3(叉头蛋白3)及TGF-β1(转化生长因子-β1)下游信号通路Smad4表达的影响。方法以BABL/c小鼠作为脾细胞供者,用研磨法分离脾脏细胞,随机分为实验组(与细粒棘球蚴囊液共同培养)和对照组,取1×105个细胞接种于96孔板上,分别在1、3、6和12 h提取RNA,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测Foxp3以及Smad4的基因表达。结果 qRT-PCR显示,细粒棘球蚴囊液处理1、3和12 h,实验组Foxp3表达量分别为4.577±0.317、8.517±0.978和7.406±0.822,对照组分别为9.274±0.451、3.297±0.408和2.464±0.328,差异均有统计学意义(P<0.05);细粒棘球蚴囊液处理1 h和12 h,实验组Smad4表达量分别为3.862±1.417和1.690±0.248,对照组分别为1.689±0.221和3.600±1.081,差异有统计学意义(P<0.05),且Foxp3与Smad4二者之间存在负相关(r=-0.991,P<0.05)。结论细粒棘球蚴囊液对小鼠脾脏细胞中Treg相对特异分子Foxp3有上调作用,而对TGF-β1的下游信号通路Smad4有下调的作用,二者之间存在负相关,提示细粒棘球蚴侵染宿主的过程中可能通过负调控TGF-β信号通路而造成宿主Treg细胞的表达升高,可能参与细粒棘球蚴感染过程中的免疫逃避。 周洋 金一帮 王俊华 吐尔洪江·吐逊 魏晓丽 张志 张传山 李亮 林仁勇 温浩关键词:细粒棘球蚴 囊液 脾细胞 FOXP3 SMAD4