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王俊华

作品数:50 被引量:125H指数:7
供职机构:新疆医科大学第一附属医院更多>>
发文基金:国家自然科学基金新疆维吾尔自治区自然科学基金长江学者和创新团队发展计划更多>>
相关领域:医药卫生生物学农业科学更多>>

文献类型

  • 45篇期刊文章
  • 4篇专利
  • 1篇科技成果

领域

  • 42篇医药卫生
  • 4篇生物学
  • 3篇农业科学

主题

  • 18篇棘球蚴
  • 16篇细胞
  • 13篇泡球蚴
  • 13篇细粒棘球蚴
  • 11篇鼠肝
  • 11篇绦虫
  • 11篇棘球绦虫
  • 10篇细粒棘球绦虫
  • 9篇小鼠
  • 9篇基因
  • 8篇受体
  • 8篇泡球蚴感染
  • 7篇肝脏
  • 6篇蛋白
  • 6篇小鼠肝
  • 6篇酵母
  • 6篇酵母双杂交
  • 6篇包虫
  • 6篇包虫病
  • 6篇TGF-Β

机构

  • 50篇新疆医科大学...
  • 8篇新疆医科大学
  • 3篇新疆大学
  • 2篇石河子大学
  • 1篇四川大学华西...

作者

  • 50篇王俊华
  • 41篇林仁勇
  • 36篇温浩
  • 31篇吕国栋
  • 28篇张传山
  • 21篇卢晓梅
  • 14篇李亮
  • 7篇魏绪法
  • 7篇张雪
  • 6篇王丽敏
  • 6篇王红丽
  • 6篇李静
  • 6篇杨乐
  • 5篇刘辉
  • 5篇张志
  • 5篇王星
  • 5篇姜涛
  • 5篇王慧
  • 4篇李朝旺
  • 4篇王颖鑫

传媒

  • 18篇中国病原生物...
  • 3篇生物技术
  • 3篇中华实验外科...
  • 2篇中国寄生虫学...
  • 2篇地方病通报
  • 2篇中国介入影像...
  • 1篇中国医学影像...
  • 1篇中国现代医学...
  • 1篇中国兽医学报
  • 1篇中国地方病学...
  • 1篇中华微生物学...
  • 1篇中华传染病杂...
  • 1篇新疆医科大学...
  • 1篇新疆医学
  • 1篇免疫学杂志
  • 1篇畜牧兽医学报
  • 1篇中华肝脏病杂...
  • 1篇中华老年心脑...
  • 1篇中华高血压杂...
  • 1篇中华消化外科...

年份

  • 2篇2017
  • 2篇2016
  • 4篇2015
  • 5篇2014
  • 6篇2013
  • 8篇2012
  • 12篇2011
  • 4篇2010
  • 7篇2009
50 条 记 录,以下是 1-10
排序方式:
细粒棘球蚴SmadA基因的克隆及其功能的初步鉴定被引量:3
2011年
本研究旨在克隆细粒棘球蚴Smad蛋白家族基因EgSmadA,鉴定其结构及表达部位,并建立酵母双杂交体系。利用生物信息学方法,克隆及分析EgSmadA基因的DNA全长序列,采用免疫组化技术鉴定EgSmadA蛋白的表达及分布,并构建该基因酵母双杂交载体。结果表明,成功扩增出EgSmadA基因组序列全长4 069bp,包含4个外显子和3个内含子,开放阅读框为957bp,编码318个氨基酸,该蛋白C端含有Smad蛋白家族进化高度保守的典型结构域MH2(Mad homology),并成功构建该基因及其MH2结构域的酵母双杂交载体。免疫组化定位该蛋白主要表达于原头蚴被膜及囊泡生发层。研究结果为进一步研究EgSmadA在细粒棘球蚴生长发育中的作用奠定了基础。
李静李静张传山吕国栋王俊华魏绪法林仁勇
关键词:细粒棘球蚴基因克隆酵母双杂交
实时荧光定量PCR检测多房棘球蚴感染小鼠肝脏丝氨酸蛋白酶抑制基因方法的建立被引量:2
2009年
目的建立多房棘球蚴(泡球蚴)感染小鼠肝脏丝氨酸蛋白酶抑制基因(Serpina3g)实时荧光定量PCR(RT—qPCR)的检测方法及与常规RT—PCR检测方法的比较。方法肉眼直视下肝脏穿刺注射100μl泡球蚴组织匀浆液建立泡球蚴感染小鼠模型,3个月后将小鼠处死,Trizol法提取肝脏总RNA,反转录获得cDNA。依据Serpina3g的编码基因(NM_009251)保守序列,通过Primer5软件设计定量引物,以β—actin作为内参。以健康小鼠肝脏获得的cDNA依次10倍梯度稀释制备标准品(1×10^2~1×10^6pg),利用SYBR Green RT-qPCR方法检测Serpina3g基因,然后根据cDNA浓度与循环值(Ct)的线性关系,绘制标准曲线,确定RT—qPCR检测的最佳条件和重复性;并将RT—qPCR结果与常规RT—PCR琼脂糖凝胶电泳结果进行特异性、灵敏度和定量等方面的比较。结果筛选出Serpina3g基因定量引物,最佳退火温度为56.g℃;RT—qPCR无非特异性扩增,标准品及样品熔解温度均在80.5℃,熔解峰单一;标准曲线斜率为-2.833(效率),相关系数r=0.996:5个不同梯度的样本(1×10^2~1×10^6pg)重复检测5次均为阳性,变异〈5%;mRNA检出限为1×10^2pg,总RNA在1×10^2-1×10^6pg内均可以进行扩增;常规RT-PCR方法mRNA检出限仅为1×10^6pg。结论成功建立了小鼠源Serpina3g的RT—qPCR检测方法,在特异性、灵敏度、重复性和定量方面优于常规RT—PCR。
王俊华刘涛王慧吕国栋卢晓梅王星姜涛温浩林仁勇
泡球蚴囊液对大鼠肝细胞TGF-βⅡ型受体及Smads信号蛋白表达的影响
2011年
目的观察泡球蚴(Em)囊液对Wistar大鼠肝细胞TGF-βⅡ型受体(TβRⅡ)及信号蛋白Smad2/3、Smad4及Smad7表达的影响。方法以Wistar大鼠作肝细胞供者,采用胶原酶肝脏原位灌流消化法分离,1×106接种于Ⅰ型胶原铺底35 mm培养皿,无血清培养20 h后,以泡球蚴囊液置换培养液培养2 h,提取蛋白,Western blot检测TGF-βⅡ型受体(TβRⅡ)、p-Smad2/3、Smad4及Smad7在肝细胞的表达。结果 Western blot显示,泡球蚴囊液处理2 h后,大鼠肝细胞内TβRⅡ、p-Smad2/3、Smad4及Smad7分别为4.71±0.73、2.37±0.34、2.08±0.23和0.19±0.05,对照组分别为1.55±0.21、0.42±0.09、0.37±0.07和0.59±0.12,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论泡球蚴囊液对大鼠肝细胞TβRⅡ、p-Smad2/3、Smad4蛋白表达均有上调作用,而对Smad7蛋白表达具有下调作用,提示泡球蚴侵染宿主过程中通过影响TGF-/βSmads信号通路而造成宿主肝损伤。
王俊华张雪李静魏绪法周晓涛张传山吕国栋卢晓梅温浩林仁勇
关键词:泡球蚴囊液肝细胞SMADS
PD-L1基因实时荧光定量RT-PCR法的建立及在大鼠肝移植中的应用被引量:2
2012年
目的建立real-time R T-qPCR(实时荧光定量R T-PCR)检测大鼠PD-L1的方法,应用该方法检测大鼠移植肝中PD-L1 mR NA的水平。方法两袖套法复制大鼠肝移植耐受组(BN→BN)及排斥组(LEW→BN)模型,术后7 d处死受体,检测肝功能ALT和AST水平,HE染色病理分析排斥程度,Trizol法提取移植肝总RNA并反转录为cDNA;选β-actin作为内参,复制SYBR GreenⅠreal-time RT-qPCR检测法。利用该方法检测移植肝中PD-L1和β-actin的初始模板量,PD-L1/β-actin计算PD-L1 mRNA的相对表达量。结果异基因LEW→BN组出现急性排斥反应,ALT、AST排斥组均高于耐受组(均P<0.05)。RAI评分排斥组高于耐受组(均P<0.05)。PD-L1扩增效率为98.8%,相关系数为0.996;溶解曲线为特异单峰;变异系数小于2.0%;移植肝中PD-L1 mRNA相对表达为耐受组([0.95±0.10)×10-2]高于排斥组([0.81±0.09)×10-2],差异有统计学意义(t=2.62,P=0.026)。结论成功建立了大鼠源PD-L1的real-time R T-qPCR检测方法,耐受组PD-L1的高表达提示其可能有利于大鼠移植肝的存活,为研究肝移植免疫耐受奠定了理论基础。
巫姜李涛赵晋明王俊华刘向伟林仁勇温浩
关键词:肝移植PD-L1实时荧光定量RT-PCRSYBR
泡球蚴感染对BALB/c小鼠肝细胞ERK1/2和p38表达变化的初步研究被引量:5
2009年
目的通过检测ERK1/2和p38在泡球蚴感染小鼠肝组织中的表达,探讨其在肝泡球蚴病发生中的作用。方法采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及免疫组织化学的方法检测16例感染组小鼠和16例对照组小鼠肝组织中的ERK1/2和p38的表达水平。结果感染组ERK1/2表达水平较对照组有统计学差异(P<0.05),p38的表达在感染组与对照组无统计学差异。结论在泡球蚴感染早期,肝细胞增殖占主导。
纪静王俊华姜涛吕国栋刘辉李瑶王红丽卢晓梅王星段新宇温浩买买提祖农林仁勇
关键词:泡球蚴ERK1/2P38小鼠
细粒棘球绦虫抗原B重组蛋白的免疫反应性被引量:2
2009年
目的利用基因工程方法表达细粒棘球绦虫抗原B重组蛋白(rAgB),并分析其免疫反应性。方法将rAgB基因片段插入原核表达载体pET41a(+)中,转化大肠埃希菌BL21(DE3)菌株,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,获得重组蛋白rAgB-GST。用谷胱甘肽琼脂糖树脂亲和层析柱(GST-sepharose4B)纯化,经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析重组蛋白的表达情况。用蛋白质印迹(Western blotting)分析其免疫反应性,并用免疫胶体金包虫诊断试剂盒作为对照。结果PCR、双酶切及DNA测序结果均显示重组质粒pET41a-rAgB构建成功。SDS-PAGE结果表明,重组蛋白rAgB-GST的相对分子质量(Mr)为40800,纯化蛋白含量为78.4%。Westernblotting分析结果显示,重组蛋白rAgB-GST检测细粒棘球蚴病和多房棘球蚴病患者血清的阳性率分别为79.2%(95/120)和51.1%(23/45),但与卫氏并殖吸虫病患者、华支睾吸虫病患者血清以及健康人血清反应均为阴性。rAgB-GST的敏感性和特异性分别为79.2%(95/120)和81.0%(98/121),均略高于免疫胶体金棘球蚴病诊断试剂盒的敏感性(72.8%,75/103)和特异性(76.9%,30/39)。结论重组rAgB-GST蛋白可被细粒棘球蚴病和多房棘球蚴病患者血清识别,有较好的免疫反应性。
吕国栋刘涛林仁勇王星王俊华任智慧温浩卢晓梅
关键词:细粒棘球绦虫免疫诊断
细粒棘球蚴转化生长因子βⅠ型受体胞内域原核表达载体的构建及蛋白纯化
2013年
目的构建细粒棘球蚴(Echinococcus granulosus,Eg)转化生长因子βⅠ型受体胞内域(transforming growth factor-βtypeⅠreceptor intracellular domain,TβRⅠ-Ⅰ)原核表达载体,诱导表达并纯化EgTβRⅠ-Ⅰ蛋白。方法采集感染Eg的羊源原头蚴,Trizol法提取原头蚴总RNA,RT-PCR扩增EgTβRⅠ-Ⅰ基因片段,克隆至原核表达载体pET28a(+),经限制性内切酶双酶切和序列鉴定正确的重组质粒转化至大肠埃希菌感受态细胞BL21,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,经镍柱亲和层析纯化蛋白,SDS-PAGE检测目的蛋白的表达。结果 pET28a-EgTβRⅠ-Ⅰ原核表达载体构建成功,经IPTG诱导可表达EgTβRⅠ-Ⅰ蛋白(分子质量单位为48ku),纯化后获得大量纯度较高的可溶性蛋白。结论成功构建pET28a-EgTβRⅠ-Ⅰ原核表达载体,并获得纯化的可溶性目的蛋白,为研究EgTβRⅠ-Ⅰ在Eg体内的生物学作用及其作用方式奠定了基础。
杨乐王丽敏张传山李亮王俊华吕国栋王慧温浩林仁勇
关键词:细粒棘球绦虫基因表达蛋白纯化
泡球蚴感染小鼠IL-17基因实时荧光定量RT-PCR方法的建立与检测被引量:3
2011年
目的建立检测泡球蚴感染小鼠IL-17的实时荧光定量RT-PCR方法,并用于泡球蚴病小鼠IL-17基因检测。方法通过腹腔注射100μl泡球蚴组织匀浆液建立泡球蚴感染小鼠模型,感染1个月后处死,提取肝脏总RNA,反转录得到cDNA;登陆GenBank,得到IL-17基因(U43088.1)全序列,选取保守序列,应用pri mer 5设计引物,β-actin作为内参,以10倍梯度稀释IL-17 PCR产物为标准品,进行实时荧光定量RT-PCR以确定方法的特异性和灵敏度;绘制标准曲线,确定IL-17基因检测的最佳条件。结果用建立的实时定量RT-PCR检测IL-17基因无非特异性扩增,各样品熔解温度均在81.0℃,熔解峰单一;mRNA检出限为1×102pg,106~102pg总RNA均有扩增;泡球蚴感染1个月后,IL-17基因表达显著增加,感染组和对照组分别为(0.008728±0.000984)和(0.003823±0.00082),差异有统计学意义(P〈0.05)。结论成功建立了小鼠源IL-17基因实时定量RT-PCR检测体系。经检测,小鼠感染泡球蚴1个月后IL-17基因表达增加,表明IL-17在泡球蚴感染免疫调节中可能起重要作用。
张志王俊华张传山吕国栋卢晓梅姜涛林仁勇温浩
关键词:泡球蚴实时荧光定量RT-PCRIL-17
细粒棘球绦虫原头蚴和成虫发育调控基因Ras GTPase的克隆及序列分析被引量:9
2009年
应用RT-PCR方法分别从新疆株细粒棘球绦虫原头蚴和成虫中克隆出Eg Ras GTPase基因,分别命名为Eg Ras-pro(GenBank登录号为EU560397)和Eg Ras-adult(GenBank登录号为EU560398)。生物信息学分析表明两者cDNA长度均为552bp,编码184个氨基酸,等电点(pI)为6.54,彼此间仅有2个碱基和1个氨基酸的差别。同源性比对分析结果显示,Eg Ras-pro和Eg Ras-adult与多房棘球绦虫Ras(EmRas)基因的同源性分别高达98.4%和98.9%;与其他种类的寄生虫、酵母、果蝇及人类的Ras GTPase基因的同源性为53.9%~78.8%。进化树分析发现Eg Ras-pro和EgRas-adult与EmRas和血吸虫Ras(SmRas)相聚集。本研究首次从新疆株细粒棘球绦虫两个发育阶段(原头蚴和成虫)中克隆出Eg Ras GTPase基因,其序列具有较高的保守性。
吕国栋王俊华卢晓梅温浩林仁勇
关键词:细粒棘球绦虫RASGTPASE
细粒棘球绦虫发育阶段表达分泌蛋白的基因芯片
一种细粒棘球绦虫发育阶段表达分泌蛋白的基因芯片,其在载体上组合有分离出的细粒棘球绦虫原头蚴、囊泡、六钩蚴、成虫四个发育阶段分泌蛋白cDNA表达序列标签的序列,该cDNA序列具有SEQ ID No.1~SEQ ID No....
温浩吕国栋张文宝林仁勇卢晓梅王俊华张传山
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