张夫坤
- 作品数：4 被引量：9H指数：2
- 供职机构：武汉生物制品研究所更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 应用生物反应器建立人用冻干狂犬病疫苗(Vero细胞)生产工艺的研究
- 目的：应用5L生物反应器，采用片状载体对Vero细胞进行高密度培养制备高毒力滴度的狂犬病毒收获液，经纯化后生产人用冻干狂犬病疫苗。
方法：采用5L生物反应器对培养方法(批次培养和连续灌流培养)进行试验，收获高毒...
- 李志强袁延宝郑淑媛代长海张夫坤顾丹阳戚凤春
- 关键词：狂犬病生物反应器冻干疫苗生产工艺
- 文献传递
- 柯萨奇病毒A16型与肠道病毒71型二价疫苗免疫原性研究
- 张夫坤
- 应用生物反应器建立人用冻干狂犬病疫苗(Vero细胞)生产工艺的研究被引量：6
- 2010年
- 应用15L生物反应器,采用片状载体对Vero细胞进行高密度培养、制备高毒力滴度的狂犬病毒收获液,经纯化后生产人用冻干狂犬病疫苗。采用15L生物反应器对培养方法(批次培养和连续灌流培养)进行试验,收获高毒力滴度的狂犬病毒收获液并制备人用冻干狂犬病疫苗。结果表明:Vero细胞在接种狂犬病毒后可以连续收获病毒液达到25d以上,冻干狂犬病疫苗的效价可以达到5.54IU/剂。本工艺可以用于进行大规模的人用冻干狂犬疫苗的生产。
- 李志强袁延宝郑淑媛代长海张夫坤顾丹阳戚凤春
- 关键词：生物反应器
- 柯萨奇病毒A组16型实壳病毒颗粒与空壳病毒颗粒免疫原性的比较被引量：3
- 2015年
- 目的比较柯萨奇病毒A组16型（coxsackievirus A16,CVA16）实壳病毒颗粒（full particle,FP）和空壳病毒颗粒（empty particle,EP）的免疫原性。方法以CVA16病毒株CVA16-L731感染Vero细胞,采用10层细胞工厂培养工艺培养病毒,收获液经离心纯化后,用甲醛灭活,获得灭活纯化的CVA16-L731 FP和EP。采用BCA法检测CVA16-L731 FP和EP的蛋白浓度,4%~12%SDS-PAGE、Western blot及透射电镜对CVA16-L731 FP和EP进行鉴定。以氢氧化铝为佐剂,分别以EP、FP、EP/FP为抗原,于第0、14、28天经后肢肌肉注射免疫BALB/c雌性小鼠,于0、7、21、35、49、63、77、91 d对小鼠进行眼眶采血。采用微量中和试验法检测免疫小鼠血清中和抗体滴度,ELISA法检测免疫小鼠血清特异性Ig G抗体滴度,母传抗体保护试验检测CVA16-L731 FP和EP的垂直保护效果。结果纯化后的CVA16-L731 FP和EP的蛋白浓度分别达到420和150μg/ml;CVA16-L731 FP可见4条相对分子质量分别约为34 000（VP1）、26 000（VP2）、24 000（VP3）和8 000（VP4）的条带,CVA16-L731 EP可见3条相对分子质量分别约为36 000（VP0）、34 000（VP1）和24 000（VP3）的条带;CVA16-L731 FP和EP的纯度均可达95%;CVA16-L731 VP1兔多抗可与FP及EP的VP1、CVA16-L731 VP2兔多抗可与FP-VP2及EP-VP0发生特异性免疫反应;CVA16-L731FP和EP分别为内部不可被磷钨酸负染的FP致密圆形颗粒和内部可被磷钨酸负染的黑色EP圆型颗粒。小鼠免疫试验结果显示,第1次免疫后各抗原免疫组小鼠血清中和抗体阳性率均为100%;第2次免疫后血清中和抗体滴度和血清特异性Ig G水平均显著升高;第3次免疫后血清中和抗体滴度均无明显变化,但血清特异性Ig G水平均明显升高;第3次免疫后的63 d内,血清中和抗体滴度均无显著变化。各抗原免疫组乳鼠存活率均为100%。结论CVA16-L731 FP和EP均能诱导小鼠持续产生较高水平的血清中和抗体和特异性Ig G抗体,且母传抗体可保护2日�
- 张夫坤卢佳吴杰王泽鋆季雅琪郑晓丽申硕
- 关键词：柯萨奇病毒A组16型中和抗体
