杜春平
- 作品数：3 被引量：2H指数：1
- 供职机构：广西医科大学第一附属医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金教育部“新世纪优秀人才支持计划”广西省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人CYB5R2基因真核表达载体的构建
- 2011年
- 目的构建人CYB5R2基因真核表达载体,并观察其在人鼻咽癌细胞HONE1中的表达。方法根据表达载体pCMV-Tag3A上的多克隆位点和CYB5R2基因CDS序列设计引物,应用RT-PCR从人睾丸cDNA中克隆出CYB5R2的CDS,并进行TA克隆。对经PCR、双酶切和双向测序验证正确的质粒,进行CDS目的片段的回收,将其连接于pCMV-Tag3A载体的多克隆位点内构建真核载体,然后进行PCR、双酶切和双向测序验证。脂质体法转染鼻咽癌细胞HONE1细胞,荧光显微镜观察和RT-PCR验证该基因的表达。结果 PCR、双酶切和双向测序结果显示pCMV-Tag3-CYB5R2-CDS真核表达载体构建成功,荧光显微镜和RT-PCR的结果显示该重组质粒在HONE1细胞中正确表达。结论成功构建了pCMV-Tag3-CYB5R2-CDS真核表达载体,并在鼻咽癌细胞HONE1中表达,为进一步验证其抑癌作用及探索其抑癌机制做准备。
- 余娜娜杜春平肖雪侯波黄光武张哲
- 关键词：鼻咽癌真核表达载体
- CHFR基因在鼻咽癌中异常甲基化的研究被引量：1
- 2011年
- 目的:检测鼻咽癌中CHFR基因的转录表达及其启动子区甲基化状态,探讨其在鼻咽癌中的转录失活机制及其意义;评价鼻咽拭子检测CHFR基因甲基化状态在鼻咽癌诊断和治疗中的意义。方法:RT-PCR检测鼻咽癌细胞株中CHFR基因的转录表达水平。甲基化特异性PCR检测鼻咽癌细胞株、鼻咽癌活检组织、正常鼻咽组织及配套的鼻咽拭子样本中CHFR基因的甲基化状态。亚硫酸氢盐测序分析鼻咽癌细胞株和鼻咽癌组织、正常鼻咽组织中CHFR基因启动子区的具体甲基化状态。5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-aza-dC)处理鼻咽癌细胞株后观察CHFR基因转录表达水平的改变情况。结果:CHFR基因在鼻咽癌细胞株中转录表达下调或沉默;CHFR基因在鼻咽癌细胞株和鼻咽癌组织中均呈高频率、肿瘤特异性的甲基化。鼻咽癌患者鼻咽癌组织和配套鼻咽拭子样本中CHFR基因的甲基化频率分别为65.5%和63.8%,两者符合率达86.2%。鼻咽癌组织和细胞株中CHFR基因启动子区大部分的CpG位点为甲基化,而正常组织全为非甲基化;5-aza-dC可显著恢复鼻咽癌细胞株中CHFR基因的转录表达。结论:鼻咽癌中CHFR基因由于启动子区CpG岛的DNA甲基化而转录表达下调。鼻咽癌中CHFR基因的甲基化与患者T分期相关。检测鼻咽拭子中甲基化的CHFR基因可望作为鼻咽癌无创诊断的手段之一。
- 黄婷婷杜春平余娜娜肖雪周晓莹王淑民黄光武张哲
- 关键词：鼻咽肿瘤CHFR基因鼻咽拭子DNA甲基化
- 拭子提取黏膜部细菌DNA方法的优化被引量：1
- 2015年
- 目的:探索一种适合于黏膜部微生物组学分析的DNA抽提方法。方法:评价玻璃珠机械破碎法+溶菌酶裂解法结合DNA提取试剂盒法(Beads+Lysozyme+QIA法)和溶菌酶裂解法结合DNA提取试剂盒法(Lysozyme+QIA法)对9例鼻咽拭子和5株常见细菌的DNA提取效果。利用NanoDrop 2000测定DNA的浓度;以末端限制性片段长度多样性(T-RFLP)分析DNA的生态结构多态性。结果:两种方法对鼻咽拭子总DNA提取量无明显差别(P=0.288);T-RFLP结果显示,Beads+Lysozyme+QIA法可得到92种末段限制性片段(T-RF),高于Lysozyme+QIA法所得的43种,Beads+Lysozyme+QIA法SDI为(2.34±0.43)明显高于Lysozyme+QIA法(1.61±1.09)(P=0.03),Beads+Lysozyme+QIA法可以获得更丰富的TRF;Beads+Lysozyme+QIA法在表皮葡萄球菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌中可获得更高的DNA提取量(均P<0.05),在甲型溶血性链球菌和枯草芽孢杆菌中两种方法无明显差异(P>0.05)。结论:优化的拭子提取细菌DNA的方法可以更大程度地反映样本中微生物的多样性,减少偏倚;有利于黏膜部微生物组学的研究。
- 明慧馨何峰陈静珊周晓莹杜春平肖雪张哲李萍黄光武
- 关键词：细菌拭子DNA提取
