引起 HBV 感染后出现复杂多样临床表现的原因,除机体免疫功能差异、重叠其他病毒(如 HCV、HEV)感染外,HBV 变异也是重要原因之一。目前认为最重要的 HBV 基因变异是前 C区的点突变。常见的前 C 区有3个突变点,其中最重要的是1896位(G→A)的突变。这些前 C 区的突变可导致慢性肝炎病情加重。突变还可影响抗病毒治疗效果。HBV 前 C 区突变的诊断主要采用基因扩增、酶切鉴定、直接序列测定等方法进行。根据 PCR 的基本原理,采用限定正链引物3′末端碱基来达到直接扩增 HBV 前 C 区点突变的目的。资料与方法一、引物设计针对 HBV 前 C 区第1896位点突变(G→A)的存在,自行设计以3′末端最后1个碱基为 A 的变异株(简称 M)引物(B1),和在其上游设计1个代表野生株(简称 W)的引物(B2)和 B1、B2共有的引物(B3),参见附图。
