王子轩
- 作品数：4 被引量：16H指数：3
- 供职机构：中国科学院上海生命科学研究院生物化学研究所更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学轻工技术与工程化学工程更多>>
- 人α-肿瘤坏死因子基因的高效表达被引量：3
- 1995年
- 用人工合成的α-肿瘤坏死因子(TNF-α)基因构建了五个不同的表达质粒,它们不同之处是SD序列与起始密码子ATG间距离(D)各异。计算机模拟计算出翻译起始区域(TIR)中二级结构的最小生成自由能,以(D)为6个核苷酸时最小(绝对值)。它的表达效率也最高,产物TNF-α可达菌体总蛋白的60％。密码子的选用对表达效率有很大的影响,故人工合成TNF-α基因(选用大肠杆菌偏爱的密码子)的表达效率高于sc-DNA(对部分密码子改造的半合成cDNA)。
- 吕兆海王子轩闵永洁包慧中刘新垣
- 关键词：Α肿瘤坏死因子基因表达基因工程
- 人白细胞介素-2在大肠杆菌高效表达及其纯化与鉴定被引量：7
- 1995年
- 研究了各种因素对IL-2表达的影响,发现(1)在本工作的条件下,消除IL-2基因3′端的部分非翻译区,能提高IL-2的表达效率;(2)IL-2基因终止密码子与终止信号间的距离对表达有影响,增加此距离(D)会大大降低IL-2表达效率;(3)启动子P_L与P_R串联与否对表达效率无关重要,即带P_R cIts857 P_L元件与带clts857 P_R P_L元件对表达IL-2的效率基本一致;(4)目的基因与选择基因的表达方向对表达IL-2的效率也无影响。在此基础上构建了高效表达的质粒(pLY-4),由它产生的IL-2达到菌体总蛋白的30％～40％,表达γ-干扰素时,可达60％～80％。还建立了简易迅速纯化IL-2的方法,分离包涵体后可达80％纯度,以后再用一步分子筛柱层析即可得到95％以上纯品。
- 虞建良范佩芳郑宏大孙兰英王子轩郑仲承李伯良陈寅唐建伟刘新垣
- 关键词：人白细胞介素-2大肠杆菌基因表达
- 合成的人γ-干扰素cDNA在大肠杆菌的高效表达被引量：5
- 1994年
- 合成了人γ－干扰素（ＩＦＮ－γ）ｃＤＮＡ其特点是选用了大肠杆菌偏爱密码子，将合成基因克隆到含ＰＬ启动子的不同表达载体中，共获得９种不同的表达质粒，它们的ＳＤ与起始密码子ＡＴＧ间的距离（Ｄ）不同，在起始翻译区（ＴＩＲ）的最小自由生成能△Ｇ°ｆ２９８不同，故其表达量的差异也大，其中ｐＬＹ４－γ５表达的ＩＦＮ－γ的量占菌体总蛋白的６０％－８０％，为国际上所罕见。表达高的原因是由于选择（Ｄ）距离适当。
- 王子轩杨迪王启松李伯良吕兆海虞建良郑宏大范佩芳唐建伟钱民章郭海鸿姚曼华郑仲承刘新垣
- 关键词：基因表达CDNA大肠杆菌
- 人基因工程γ-干扰素发酵过程的研究被引量：4
- 1993年
- 分析大肠杆菌 K802(pLY-4)生产人γ-干扰素的发酵过程后发现,采用丰富培养基(改良 LB+M9),既适合于细菌生长,又适合于γ-干扰素的表达。采用逐步升温、控制不同发酵阶段的 pH 及保持高的溶解氧浓度,可提高重组质粒的稳定性和细胞的生长速率,使γ-干扰素的表达量达4.0×10~6IU/ml,表达水平约占菌体蛋白的55%。
- 周永春刘登奇浦兆伟陆德如刘新垣王子轩王启松
- 关键词：基因工程发酵干扰素
