杜巍
- 作品数：4 被引量：13H指数：2
- 供职机构：东北农业大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项转基因生物新品种培育专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 牛结蛋白基因启动子的克隆及功能的初步分析被引量：5
- 2014年
- 旨在克隆牛结蛋白基因不同长度的启动子片段,并对其进行功能分析。本研究采用PCR法扩增牛结蛋白基因不同长度的启动子缺失序列,构建pGL3-desminpro双荧光素酶表达载体,使其转染牛骨胳肌卫星细胞和胎儿成纤维细胞,进行活性检测。同时转染牛MyoG和βα-actin基因启动子的表达载体,以比较结蛋白启动子和MyoG及α-actin启动子的表达活性。结果表明,牛结蛋白基因的132~2106 bp启动子都能不同程度的启动双荧光素酶报告基因在牛骨胳肌卫星细胞中的表达,且都具有肌肉特异性。300bp的结蛋白基因启动子活性最高,且高于牛MyoG和α-actin基因启动子的活性。从而筛选出300 bp的结蛋白基因启动子为活性较高且大小合适的肌肉特异性启动子,这为转基因肉牛的生产方面奠定了重要的基础。
- 杜巍李树峰佟慧丽杨翠翠刘丹严云勤
- 关键词：启动子序列转染
- 诱导小鼠胚胎干细胞在体外分化为骨骼肌细胞的实验研究
- 2013年
- 小鼠胚胎干细胞是从胚泡未分化的内部细胞团中得到的干细胞,它在体外培养的环境中具有无限增殖、自我更新以及多向分化的特性。将小鼠胚胎干细胞在体外诱导分化为肌肉细胞,并且利用这些分化得来的肌肉细胞治疗肌肉退行性疾病,是干细胞研究领域的热点。该实验的目的在于筛选小鼠胚胎干细胞向骨骼肌细胞定向分化的实验条件,有效地将体外单层贴壁培养的小鼠胚胎干细胞诱导分化成骨骼肌细胞。最终发现,10-8mol/L维甲酸(retinoid acid,RA)+0.5%二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)组诱导小鼠胚胎干细胞在体外分化成骨骼肌前体细胞的效率最高,分化得到的骨骼肌前体细胞经进一步纯化,能分化为多核的肌管。该实验为治疗肌肉退行性疾病提供了细胞来源,也为研究小鼠胚胎干细胞分化为骨骼肌细胞的机制提供了有利的条件。
- 叶枫佟慧丽杜巍严云勤
- 关键词：小鼠胚胎干细胞骨骼肌细胞分化
- 利用TALEN技术在牛胎儿成纤维细胞中敲除Myostatin基因被引量：8
- 2014年
- 肌肉生长抑制素(Myostatin,MSTN)基因能够负向调节骨骼肌的生长和发育,牛MSTN基因突变会出现"双肌"特征。文章利用转录激活因子样效应物核酸酶(TALENs)靶向敲除牛胎儿成纤维细胞的MSTN基因,获得敲除MSTN基因的细胞系,为制备MSTN基因敲除牛提供材料。构建一对MSTN基因的TALENs真核表达载体,分别采用PEI转染试剂和电穿孔法进行牛胎儿成纤维细胞的转染,测序结果表明TALEN技术可用于敲除牛MSTN基因,利用T7核酸内切酶1(T7E1)检测其突变效率,结果显示电穿孔转染的敲除效率为20.4%。通过有限稀释法,共获得10个MSTN基因敲除的细胞克隆(包括MSTN-/-和MSTN+/-),其靶位点敲除的碱基数分别是1～20不等,部分会出现移码突变。出现移码突变的细胞系可用于MSTN基因敲除的转基因肉牛的制备。
- 杨翠翠佟慧丽马兴红杜巍刘丹杨宇严云勤
- 关键词：MYOSTATIN转染
- 牛结蛋白基因启动子的克隆及功能的初步分析
- 2015年
- 旨在克隆牛结蛋白基因不同长度的启动子片段,并对其进行功能分析。本研究采用PCR法扩增牛结蛋白基因不同长度的启动子缺失序列,构建p GL3-desminpro双荧光素酶表达载体,使其转染牛骨骼肌卫星细胞和胎儿成纤维细胞,进行活性检测。同时转染牛Myo G和βα-actin基因启动子的表达载体,以比较结蛋白启动子和Myo G及α-actin启动子的表达活性。
- 杜巍李树峰佟慧丽
- 关键词：结蛋白骨骼肌卫星细胞荧光素酶活性检测胎儿成纤维细胞克隆牛
