杨翠翠
- 作品数:3 被引量:13H指数:2
- 供职机构:东北农业大学生命科学学院更多>>
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- 转MSTN干扰载体细胞株的获得及外源基因整合情况的研究
- 2014年
- 转基因细胞株的建立能够为转基因体细胞克隆技术奠定重要基础。该实验利用MSTN干扰载体,转染鲁西黄牛胎儿成纤维细胞,获得5个相应的转基因单克隆细胞株。采用Realtime PCR和高效热不对称互交式PCR(hiTAIL-PCR)技术检测细胞克隆中MSTN表达载体的拷贝数及其在牛基因组中的整合位点。结果表明,荧光定量PCR有效检测到5个细胞克隆中质粒的拷贝数分别为2.26±0.32、1.52±0.25、25.68±1.02、8.43±0.73和6.72±0.10。hiTAIL-PCR对整合位点的检测结果表明,质粒片段在插入到基因组的过程中进行了重组,其与基因组的结点处有2或4个共同的碱基序列。该研究探索MSTN干扰载体在牛胎儿成纤维细胞中的整合机制,以期获得遗传背景清楚的转基因细胞作为体细胞核移植的重要材料,为高产转基因肉牛新品种的培育提供重要的理论和实验基础。
- 刘丹佟慧丽李树峰常淑伟杨翠翠严云勤
- 关键词:MSTN拷贝数整合位点REAL-TIME
- 牛结蛋白基因启动子的克隆及功能的初步分析被引量:5
- 2014年
- 旨在克隆牛结蛋白基因不同长度的启动子片段,并对其进行功能分析。本研究采用PCR法扩增牛结蛋白基因不同长度的启动子缺失序列,构建pGL3-desminpro双荧光素酶表达载体,使其转染牛骨胳肌卫星细胞和胎儿成纤维细胞,进行活性检测。同时转染牛MyoG和βα-actin基因启动子的表达载体,以比较结蛋白启动子和MyoG及α-actin启动子的表达活性。结果表明,牛结蛋白基因的132~2106 bp启动子都能不同程度的启动双荧光素酶报告基因在牛骨胳肌卫星细胞中的表达,且都具有肌肉特异性。300bp的结蛋白基因启动子活性最高,且高于牛MyoG和α-actin基因启动子的活性。从而筛选出300 bp的结蛋白基因启动子为活性较高且大小合适的肌肉特异性启动子,这为转基因肉牛的生产方面奠定了重要的基础。
- 杜巍李树峰佟慧丽杨翠翠刘丹严云勤
- 关键词:启动子序列转染
- 利用TALEN技术在牛胎儿成纤维细胞中敲除Myostatin基因被引量:8
- 2014年
- 肌肉生长抑制素(Myostatin,MSTN)基因能够负向调节骨骼肌的生长和发育,牛MSTN基因突变会出现"双肌"特征。文章利用转录激活因子样效应物核酸酶(TALENs)靶向敲除牛胎儿成纤维细胞的MSTN基因,获得敲除MSTN基因的细胞系,为制备MSTN基因敲除牛提供材料。构建一对MSTN基因的TALENs真核表达载体,分别采用PEI转染试剂和电穿孔法进行牛胎儿成纤维细胞的转染,测序结果表明TALEN技术可用于敲除牛MSTN基因,利用T7核酸内切酶1(T7E1)检测其突变效率,结果显示电穿孔转染的敲除效率为20.4%。通过有限稀释法,共获得10个MSTN基因敲除的细胞克隆(包括MSTN-/-和MSTN+/-),其靶位点敲除的碱基数分别是1~20不等,部分会出现移码突变。出现移码突变的细胞系可用于MSTN基因敲除的转基因肉牛的制备。
- 杨翠翠佟慧丽马兴红杜巍刘丹杨宇严云勤
- 关键词:MYOSTATIN转染