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His-猪生长激素融合基因在Bm-N细胞和蚕体内的表达与纯化被引量：2: 2005年; 用构建的带有His-Tag pgh融合基因的重组杆状病毒Bm-BacPAK6-pgh研究了Bm-BacPAK6- pgh在家蚕细胞(Bm-N)和蚕体内的表达,并对蚕体表达产物进行了纯化.SDS-PAGE电泳分析显示,重组病毒Bm-BacPAK6-pgh在Bm-N细胞、蚕体中得到了融合表达,Wemrn blot分析表明,Bm-N细胞、蚕体中表达的融合蛋白与大肠杆菌表达的猪生长激素具有相同的抗原性.Bm-BacPAK6-pgh在Bm-N细胞内的表达始于24h,而蚕体中的表达始于72h,二者的表达峰分别在96h和120h.经40%饱和度硫酸铵盐析和Ni -NTA Agarose亲和柱二步纯化可获得SDS-PAGE电泳纯的具有抗原性的重组猪生长激素融合蛋白.; 姜秀英朱艳彭建明曹广力朱江; 关键词：猪生长激素融合基因 BIN 家蚕细胞电泳分析蚕体

His-猪生长激素融合基因在大肠杆菌中的表达与纯化被引量：6: 2005年; 将通过PCR技术改建并去除了信号肽的猪生长激素cDNA克隆入大肠杆菌表达载体pET-28a(+),构建出能利用Ni-NTAAgarose柱一步纯化表达产物的重组质粒pPGH020。探讨了大肠杆菌中重组猪生长激素的最佳表达条件和纯化方法,制备并纯化了兔抗pGH抗体。SDS鄄PAGE和Westernblot的分析结果表明,26.5kD处有包括His·Taq、thrombin位点序列和pGH序列的融合蛋白特异条带。凝胶扫描估测猪生长激素的表达量占大肠杆菌胞浆蛋白的17.3%左右。; 朱江曹广力姜秀英王雪峰朱艳邓忠斌李新平沈颂东马泓冰贡成良; 关键词：猪生长激素基因大肠杆菌表达抗体IGG

抗人CD28单链抗体基因的构建及在BmN细胞和家蚕中的表达被引量：3: 2007年; 采用TP-PCR法,将抗人CD28单链抗体的重、轻链可变区基因和人工设计的昆虫杆状病毒多角体蛋白基因(ph)偏好的连接肽序列,拼接成抗人CD28单链抗体(抗CD28-ScFv)基因,并将其插入昆虫杆状病毒转移载体pBacPAK8的ph启动子,构建成重组转移载体pBacPAK8/CD28-ScFv。为便于表达产物的纯化,在CD28-ScFv的C端增加了6×Histag序列。通过脂质体介导法将重组转移载体pBacPAK8/CD28-ScFv和线性化病毒Bm-BacPAK6共转染BmN细胞,经空斑分析和蓝白斑筛选,获得重组杆状病毒Bm-BacPAK6 CD28-ScFv。将重组病毒Bm-BacPAK6 CD28-ScFv感染BmN细胞和5龄家蚕,SDS-PAGE和Western Blotting分析表明,在分子量约为28kD处有一表达带。BmN细胞的表达始于24h,表达峰在72h,96h时表达量开始下降,而5龄家蚕的表达始于48h,表达峰在120h。结果证明,抗人CD28单链抗体基因在BmN细胞和家蚕中得到了特异性表达。上述研究成果为抗人CD28基因工程抗体的研制奠定了基础。; 朱艳郑峰丰陈永井邱玉华朱江; 关键词：CD28 单链抗体家蚕真核表达

TP-PCR法构建抗人CD28嵌合抗体双启动子昆虫杆状病毒重组转移载体被引量：9: 2005年; 为构建能同时表达抗人CD28嵌合重链和嵌合轻链基因的双启动子杆状病毒转移载体,利用PCR法扩增出抗人CD28鼠源性单抗的可变区基因和人IgG1的恒定区基因,再采用一种不需要限制性核酸内切酶和连接酶的新方法———三引物PCR(TP_PCR)法将两者拼接后分别插入杆状病毒转移载体pAcUW3的ph和p10启动子后,并通过酶切、电泳、PCR扩增和测序对重组体进行了鉴定。研究结果表明,TP_PCR法快速、方便、准确,无需设计外源的DNA序列,就能构建完好的融合表达基因。该转移载体的构建成功为嵌合抗体基因在昆虫细胞中的表达奠定了基础。; 朱艳陈永井邱玉华郑峰丰朱江; 关键词：杆状病毒嵌合抗体

抗人CD28单链抗体和嵌合抗体转移载体的构建及单链抗体基因在BmN细胞中的表达: CD28分子是表达于T淋巴细胞表面的跨膜糖蛋白,参与介导T细胞活化所需的协同刺激信号,属于免疫球蛋白超家族。已有的研究表明,CD28单克隆抗体对肿瘤、自身免疫性疾病及移植排异等均具有重要的治疗意义,但体内长期使用会降低治...; 朱艳; 关键词：CD28 单链抗体嵌合抗体; 文献传递

6×His-猪生长激素融合基因在家蚕生物反应器中的表达被引量：5: 2004年; 将通过PCR技术改建并去除了信号肽的猪生长激素cDNA基因克隆入转移载体pBacPAK His1,构建了重组转移载体pPGH0 30 ,进而将pPGH0 30与线性化病毒Bm BacPAK6共转染BmN细胞 ,成功获得了猪生长激素重组杆状病毒Bm BacPAK6 pgh。感染重组病毒的细胞可溶性蛋白SDS PAGE和Western blot分析结果显示 ,感染细胞蛋白电泳带的 2 5kD处有 1条猪生长激素特异带。Bm BacPAK6 pgh的BmN细胞培养液接种家蚕 5龄幼虫和蛹 ,感病幼虫与蛹血淋巴的SDS PAGE和Western blot分析结果表明 ,6×His 猪生长激素融合基因在家蚕体内得到了表达 ,特异性条带大小约为 2 5kD。; 朱江姜秀英曹广力朱艳彭建明李新平沈颂东贡成良; 关键词：猪生长激素融合基因家蚕生物反应器

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朱艳