夏晓辉
- 作品数：7 被引量：16H指数：2
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- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 猪附红细胞体PCR-ELISA检测方法的建立被引量：7
- 2013年
- 根据猪附红细胞体OxaA膜蛋白基因设计了1对分别标记生物素和地高辛的引物,将PCR扩增产物固定至链霉亲和素包被的酶标板中进行酶联显色检测,并优化PCR扩增及ELISA检测步骤,建立了猪附红细胞体PCR-ELISA。结果显示,该方法较传统的PCR-ELISA节约近2h,最低能检出0.36pg的猪附红细胞体DNA,敏感性比常规PCR高10倍,且与猪链球菌、猪肺炎霉形体、大肠杆菌等无交叉反应。用该方法对64份猪血液中提取的DNA样品进行检测,结果阳性检出率为35.9%,明显高于常规PCR的28.1%。结果表明,建立的猪附红细胞体PCR-ELISA具有敏感、特异、安全和快速的特点。
- 夏晓辉丁晓双张晓轩海旭南贾立军张守发许应天
- 关键词：猪附红细胞体PCR-ELISA
- 使用烙铁进行黄牛子宫脱垂截除手术的体会被引量：1
- 2013年
- 黄牛是我国山区农民的重要使役动物，子宫脱垂是黄牛的一种常见产科疾病，可引起阴道及子宫水肿、子宫内膜炎、生产瘫痪甚至死亡，给山区农业生产造成巨大损失。轻微的子宫脱垂可通过整复手术进行复位，但遇到难以整复或是污染严重的状况时，则需要通过子宫截除术以保全黄牛。
- 夏齐培夏晓辉赵妍
- 关键词：子宫脱垂黄牛烙铁山区农民整复手术产科疾病
- 猪附红细胞体PCR-ELISA检测方法的建立及初步应用
- 猪附红细胞体病(Mycoplasma suis)是由猪附红细胞体引起的，以发热、贫血、黄疽等为主要临床症状的人畜共患病，能引起仔猪贫血、稽留热，育肥猪生长发育迟缓以及母猪不孕、流产等生理障碍，并可通过血液等多种方式传播，...
- 夏晓辉
- 关键词：猪附红细胞体PCR-ELISA检测基因序列
- 文献传递
- 犬附红细胞体PCR检测方法的建立及应用被引量：5
- 2013年
- 通过将GenBank上报道的犬附红细胞体16S rRNA基因序列与其他物种同源序列进行比对,取其种间特异性和种内保守性较高区域设计1对引物,以吉林省延边地区犬附红细胞体基因组DNA为模板进行PCR扩增,并进行特异性、敏感性试验验证,建立犬附红细胞体PCR诊断方法,应用于临床检测。结果表明:该方法可成功扩增出大小为529 bp的犬附红细胞体片段,与GenBank中German no.1(AY150973.1)序列同源性为98.5%。其最低DNA检测量为25 fg/μL,不与犬巴贝斯虫、犬弓形虫及猪附红细胞体等病原体基因组产生交叉反应。同时通过对57份犬血液样本的检测结果说明,该方法检出率明显高于姬姆萨染色镜检法,且避免了假阳性。本试验所建立的PCR检测方法具有特异、敏感、准确等优点,为犬附红细胞体病的诊断提供了一种可靠的方法。
- 夏晓辉丁晓双张晓轩张守发许应天
- 关键词：犬附红细胞体PCR
- 牛瑟氏泰勒虫双拷贝p23表面蛋白基因真核表达
- 2011年
- 为构建牛瑟氏泰勒虫双拷贝p23表面蛋白基因真核表达质粒,根据GenBank牛瑟氏泰勒虫p23表面蛋白基因序列(D84447),分别设计2对特异性引物,利用全血基因组DNA提取试剂盒提取牛瑟氏泰勒虫基因组DNA,采用SOE-PCR技术构建双拷贝p23基因,克隆到pMD-18一T载体上,经过PCR、酶切鉴定及测序后,亚克隆到pVAX-I真核表达载体上,经过鉴定后采用脂质体法将重组质粒pVA XI-2p23转染到BHK-21细胞,用IFA和RT-PCR来鉴定目的基因的表达情况.结果表明,成功构建了牛瑟氏泰勒虫双拷贝p23表面蛋白基因真核表达质粒,并在BHK-21细胞中获得表达.
- 孙平杰夏晓辉丁晓双许应天
- 关键词：牛瑟氏泰勒虫
- 延边黄牛白细胞介素18基因的克隆及序列分析
- 2012年
- 本试验旨在扩增延边黄牛白细胞介素18(IL-18)全长cDNA,并对其序列进行进化分析。根据GenBank中已公布的牛IL-18cDNA序列设计1对引物,利用RT-PCR从刀豆蛋白(ConA)和植物分裂素(PHA)双重刺激36h活化的延边黄牛脾淋巴细胞中扩增出牛IL-18全长cDNA,进行PCR、酶切和测序鉴定,并做进化分析及二级结构预测。扩增出延边黄牛IL-18全长cDNA,大小为760bp,其中有两个氨基酸突变。进化分析结果显示,延边黄牛IL-18与牛、山羊、绵羊、马和猪的同源性较高,均大于90%,与同种群牛的同源性最高,而与原鸡的同源性最低,为51.1%。本研究确定了IL-18的种群差异,并预测了二级结构特性,为进一步研究延边黄牛IL-18的基因表达、生物活性及其作为佐剂的应用奠定了基础。
- 张立霞高旭宋建臣孙平杰夏晓辉许应天
- 关键词：RT-PCR进化分析
- 牛瑟氏泰勒虫二温式PCR快速检测技术的建立及初步应用被引量：2
- 2013年
- 为建立一种牛瑟氏泰勒虫快速检测技术,根据GenBank上已发表的牛瑟氏泰勒虫P23表面蛋白基因序列(D84447)设计1对特异性引物,扩增出大小为244 bp的基因片段,经克隆、测序分析,与已知基因序列同源性为100%。用该对引物建立的牛瑟氏泰勒虫二温式PCR能检测出的最高敏感度为171 fg/μL,与牛新孢子虫、弓形虫和卵形巴贝斯虫不产生交叉反应,对48份临床血液样本进行检测,阳性检出率为66.67%。用同一对引物对28份临床血液样本分别进行二温式PCR和三温式PCR检测,阳性符合率为95%,总符合率为96.43%。结果表明,该方法具有快速、敏感、特异等优点,可用于牛瑟氏泰勒虫病的快速临床诊断及流行病学调查。
- 丁晓双夏晓辉张晓轩海旭楠许应天
- 关键词：牛瑟氏泰勒虫二温式PCR
