吉琼梅
- 作品数：7 被引量：28H指数：4
- 供职机构：深圳大学生命科学学院过敏反应与免疫学研究所更多>>
- 发文基金：深圳市科技计划项目国家自然科学基金国际科技合作与交流专项项目更多>>
- 相关领域：医药卫生轻工技术与工程更多>>
- 小龙虾钙结合蛋白的免疫学特性鉴定与单克隆抗体的制备被引量：4
- 2017年
- 目的克隆、表达、纯化具有免疫原性的重组小龙虾钙结合蛋白(SCP),并制备高效价抗SCP单克隆抗体。方法用亲和层析法获取小龙虾重组SCP,通过Western Blotting和ELISA法进行免疫学活性鉴定;以重组SCP为免疫原,免疫BALB/c小鼠,再取小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞NS-1进行细胞融合;利用ELISA法筛选出能分泌特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞,然后利用该杂交瘤细胞株刺激小鼠,取腹水,用蛋白A亲和层析方法纯化获得抗体;通过Ig类/亚类鉴定ELISA试剂盒鉴定该单克隆抗体的Ig亚型;通过Western Blot和间接ELISA法鉴定单克隆抗体的交叉性和特异性。结果经SDS-PAGE鉴定获得了纯度较高的重组SCP,免疫学鉴定结果显示,重组的SCP蛋白具有较好的IgE结合活性,阳性率为40%。通过杂交瘤细胞融合技术,共获得了抗SCP细胞株2株,分别命名为1A12和3H12,效价均高于20万。经抗体亚型鉴定,2株抗体均为IgG1型。Western Blot的结果表明2株抗体能识别重组SCP。在特异性检测实验中,1A12抗体与其他种类食物过敏原无交叉反应,而3H12与鱼粗蛋白过敏原有交叉反应性。结论 SCP是小龙虾的重要过敏原,本实验获得了纯度较高的重组SCP,并制备了2株高效价抗SCP单克隆抗体,为小龙虾SCP、甲壳类食物过敏原的检测及标准化过敏原物质的制备奠定了基础。
- 陈献雄邬玉兰吉琼梅杨平常刘志刚
- 关键词：小龙虾钙结合蛋白免疫学特性单克隆抗体
- 蜂毒肽对成熟树突细胞诱导T细胞分化的免疫调节的影响被引量：4
- 2017年
- 通过蜂毒肽(Melittin,MT)干预脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)刺激树突细胞(Dendritic Cell,DC)与淋巴细胞共培养,以探究MT对Th1/Th2分化的影响。用MTS检测LPS、MT对DC与淋巴细胞共培养活性;流式细胞术检测MT对LPS刺激DC与淋巴细胞共培养中Th1、Th2比例;ELISA检测LPS刺激DC与淋巴细胞共培养中细胞上清液中IL-4、INF-γ浓度。结果显示MT、LPS在一定浓度下刺激DC与淋巴细胞共培养的活性;在成熟的DC诱导下,MT能上调Th1/Th2比例、Th1百分率(P<0.05)及IFN-γ浓度(P<0.01);对IL-4浓度、Th2百分率无影响(P>0.05)。本研究说明MT通过上调Th1细胞比例,IFN-γ浓度,促进Th1/Th2细胞向Th1方向分化途径对T细胞起免疫调节作用。
- 熊浪平贺守第关彤莫丽华杨平常刘志刚吉琼梅黄胜光
- 关键词：蜂毒肽树突细胞T细胞免疫调节
- 花生主要过敏原Ara h1单克隆抗体的制备与应用被引量：7
- 2017年
- 目的制备与鉴定抗花生主要过敏原Ara h1单克隆抗体,建立双单抗ELISA法,检测食品中花生过敏原。方法以花生主要过敏原Ara h1为抗原免疫Balb/c小鼠,融合免疫鼠脾细胞和小鼠骨髓瘤细胞NS-1。半固体培养基法结合有限稀释法筛选稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株后诱生小鼠腹水,采用蛋白A亲和层析法获得纯化抗体。利用Ig类与亚类鉴定试剂盒鉴定该单克隆抗体的Ig亚型。间接ELISA法和Western blot鉴定抗体效价和特异性以及与其他过敏源的交叉反应性。建立双单抗夹心ELISA法检测食品中的花生过敏原。结果共获得抗Ara h1细胞株4株,分别命名为2G9、5G4、5B5、2C7,效价均高于1∶106。经抗体亚型鉴定,4株抗体均为Ig G1型。Western blot的结果表明4株抗体均能识别Ara h1,其中2G9与5G4结合能力较强。在特异性检测实验中,2G9和5G4与其他种类过敏原无交叉反应。通过建立双单克隆抗体夹心ELISA法,发现花生Ara h1蛋白的检出低限为:5 ng/ml,标准曲线在~80 ng/ml范围内线性良好。利用此法检测了10种食品,结果显示在5种含有花生成分的食品中均检测到了花生过敏原。结论获得高效价抗体4株,建立了高效、高特异性的食品中花生过敏原的检测方法,为食品中花生过敏原的检测提供了依据。
- 陈献雄邬玉兰吉琼梅杨平常刘志刚
- 关键词：单克隆抗体过敏原检测
- 牛奶过敏原β-乳球蛋白的单克隆抗体制备及其双抗体夹心法的建立被引量：6
- 2015年
- 目的制备与鉴定牛奶主要过敏原β-乳球蛋白(β-LG)的单克隆抗体,并建立双抗体夹心检测法。方法以β-LG为抗原免疫BALB/c小鼠,融合免疫鼠脾细胞和小鼠骨髓瘤NS-1。半固体培养基法结合有限稀释法筛选稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株。杂交瘤细胞株诱生小鼠腹水,采用蛋白A亲和层析法获得纯化抗体。利用Ig类与亚类鉴定试剂盒鉴定该单克隆抗体的Ig亚型。间接ELISA方法和Western Blot鉴定抗体效价和特异性以及与其他过敏原的交叉反应性。建立双单克隆抗体夹心法,检测β-LG。结果共获得抗β-LG细胞株6株,分别命名为1H8,4A7,4C3,1F9,1G5,3D11,效价均高于20万。经抗体亚型鉴定,6株抗体均为Ig G1型。Western Blot的结果表明6株抗体能识别β-LG。在特异性检测实验中,6株抗体与其他种类食物过敏原无交叉反应,而1G5和3D11与牛奶酪蛋白过敏原有交叉反应性。通过建立双单克隆抗体夹心ELISA法,发现牛奶β-LG蛋白的检出低限为:15.625 ng/m L,标准曲线在15.625~250 ng/m L范围内线性良好。结论获得高效价抗体6株,建立了高效、高特异性的牛奶过敏原β-LG的检测方法,为食品中牛奶过敏原的检测提供了依据。
- 陈献雄邬玉兰吉琼梅杨平常刘志刚
- 关键词：单克隆抗体过敏原检测
- 类风湿关节炎血清植物性食物过敏原特异性IgG和IgE检测被引量：8
- 2016年
- 目的检测类风湿关节炎患者4种植物性食物过敏原Ig G和Ig E水平,探讨类风湿关节炎与食物过敏的相关性。方法收集2013年9月至2014年5月深圳市第六人民医院50例类风湿关节炎患者和45例健康人血清,采用酶联吸附法检测血清花生、大豆、榛子、小麦4种食物过敏原特异性Ig G和Ig E水平。结果类风湿关节炎组与正常组血清花生、大豆特异性Ig G比较差异有统计学意义(1.31±0.36 vs.1.08±0.35;1.22±0.33 vs.1.07±0.32;均P<0.01);血清榛子、小麦特异性Ig G,血清花生、大豆、榛子、小麦特异性Ig E比较差异无统计学意义(P>0.05)。老年性类风湿关节炎组(年龄≥60岁)与非老年类风湿关节炎组(年龄<60岁)血清花生、大豆、榛子、小麦食物过敏原特异性Ig G、Ig E比较差异无统计学意义。结论类风湿关节炎与食物过敏有相关性,食物过敏与类风湿关节炎发病年龄无明显相关性。
- 谭宁贺守第倪慧婕杨平常刘志刚黄胜光吉琼梅
- 关键词：食物过敏特异性IGG特异性IGE
- 类风湿关节炎动物性食物过敏原IgG和IgE的检测被引量：2
- 2015年
- 目的检测类风湿关节炎患者血清中4种动物性食物过敏原Ig G和Ig E水平,了解类风湿关节炎与动物性食物过敏原的相关性。方法收集2013年9月至2014年5月深圳市第六人民医院48例类风湿关节患者血清、40例健康人血清。采用酶联吸附法检测血清中牛奶、鸡蛋、虾、鱼4种食物过敏原特异性Ig G和Ig E水平。结果 RA组与正常组血清中鸡蛋特异性Ig G比较有明显差异(P<0.05);血清牛奶、虾、鱼特异性Ig G,血清牛奶、鸡蛋、鱼、虾特异性Ig E检测无明显差异。老年性类风湿关节炎组(ERA,年龄≥60岁)与非老年类风湿关节炎组(NERA,年龄<60岁)血清牛奶、鸡蛋、鱼、虾4种食物过敏原特异性Ig G、Ig E无明显差异。结论鸡蛋过敏原可能诱发类风湿关节炎,血清动物性食物过敏与类风湿关节炎发病年龄无明显相关性。
- 贺守第倪慧婕杨平常刘志刚吉琼梅黄胜光
- 关键词：类风湿关节炎
- 榛子主要过敏原Cor h 1单克隆抗体识别抗原表位区域的确定
- 2012年
- 目的确定已获得的四株榛子主要过敏原Cor h1单克隆抗体识别的抗原表位区域。方法构建谷胱甘肽疏基转移酶(GST)与Cor h1不同截短体的表达载体并表达GST-Cor h1融合蛋白,采用ELISA和Western blot检测单抗与不同融合蛋白的反应,并结合DNAstar表位分析软件推知不同单抗的抗原识别表位区域。结果确定了四株Cor h1单抗的抗原识别表位区域,分别是4G7和2H3抗体的抗原表位位于Cor h1第120～126位氨基酸,5F2和1G4抗体的抗原表位位于Cor h1第43～52位氨基酸。结论四株Cor h1单抗的抗原识别表位区域的确定,为Cor h1的进一步研究和食品安全检测奠定了基础。
- 赵郭存张强杨波吉琼梅刘志刚
- 关键词：CORH抗原表位
