顾晓艳
- 作品数：6 被引量：3H指数：1
- 供职机构：重庆医科大学附属儿童医院更多>>
- 发文基金：重庆市卫生局医学科研项目国家自然科学基金重庆市卫生局科研项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- BMP信号通路在先天性肠无神经节细胞症发生中的作用及机制研究
- 目的：研究BMP信号系统在肠神经节细胞、肠平滑肌组织发生、分化、增殖中的作用,揭示肠无神经节细胞症的发病原因。方法：①获取肠神经嵴干细胞(ENSCs),鉴定干细胞特性(Nestin、P75、CD49d+),采用原代培养及...
- 金先庆郭振华李晓庆丁雄辉王士奇顾晓艳
- 关键词：发病原因
- Frizzled/LRP受体与ROR2受体在白血病细胞中的表达及其机制研究被引量：2
- 2011年
- 目的:探讨WNT信号通路中卷曲蛋白-低密度脂蛋白相关蛋白复合受体(Frizzled/LRP)、酪氨酸激酶样孤独受体-2(ROR2)在淋巴细胞白血病发生发展中的作用。方法:实验分组:1)实验组1:急性淋巴细胞白血病骨髓(ALL);2)对照组1:特发性血小板减少性紫癜骨髓(ITP);3)实验组2:氯化锂作用后的Jurkat、K562和HL-60细胞株;4)对照组2:Jurkat、K562和HL-60细胞株。以RT-PCR方法从mRNA水平检测Frizzled/LRP(FZD/LRP)受体、ROR2受体的表达;以Western blot方法从蛋白水平检测FZD-5和ROR2的表达;通过MTT法检测细胞增殖情况;通过流式细胞仪检测细胞周期。结果:所有白血病细胞中均可见FZD-2、LRP-6和ROR2的表达,ROR2在HL-60细胞中的表达明显低于其他白血病细胞,其他各组受体表达水平未见差异;11例ITP骨髓标本中2例标本可见ROR2表达,FZD受体的表达与白血病细胞无显著性差异。氯化锂处理后,ROR2在Jurkat细胞中的表达明显减少,其他受体的表达未见显著性差异。重复MTT试验结果显示:不同浓度(5、10、20mmol/L)氯化锂(LiCl)对各组细胞均有增殖抑制作用,在一定范围内呈剂量依赖性。氯化锂处理后,Jurkat和HL-60细胞周期与正常组相比G_1期和S期比例减少,G_2期增高,发生G_2/M期阻滞,差异有统计学意义(P<0.05)。不同浓度组K562的细胞周期未见明显差异。结论:ROR2在急性淋巴细胞白血病骨髓中的表达较其在ITP骨髓中的表达高,在Jurkat细胞株中有高表达,氯化锂作用后的Jurkat细胞中ROR2的表达明显减低,细胞增殖受抑制,提示ROR2可能与淋巴细胞白血病的发生有关。
- 李瑞燕胡艳妮顾晓艳徐酉华
- 关键词：WNT信号通路氯化锂白血病
- siRNA干扰wnt5a表达对Jurkat细胞生长的影响及机制研究
- 2011年
- 目的:干扰wnt5a在Jurkat细胞中的表达,探讨wnt5a对Jurkat细胞增殖、细胞周期、凋亡的作用及其机制。方法:采用大肠杆菌BJ5183内同源重组的方法构建特异性干扰wnt5a的腺病毒Ad5-wnt5asi,感染Jurkat细胞。实验分为实验组(感染重组腺病毒的Jurkat细胞)、空载体组(感染腺病毒的Jurkat细胞)及空白对照组(Jurkat细胞)。采用MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡,RT-PCR检测各组细胞wnt5a、β-catenin、钙调蛋白依赖性激酶Ⅱ(Calmodulin dependent proteinkinaseⅡ,CaMKⅡ)、cyclinD1、c-myc、survivin mRNA表达,Western blot检测干扰前后β-catenin、CaMKⅡ、cyclinD1蛋白表达。结果:(1)实验组细胞增殖与空载体组及空白对照组相比显著增高(P<0.05)。(2)实验组与其他两组相比,G1期细胞比例显著降低,S期细胞比例显著增多(P<0.05),G2期细胞比例无明显差异(P>0.05)。实验组与其他两组相比,细胞凋亡率显著降低(P<0.05)。(3)实验组细胞wnt5a mRNA表达降低(55.52±0.61)%,差异有统计学意义(P<0.05)。(4)实验组与其他两组相比,CaMKⅡmRNA表达明显降低,β-catenin、cyclinD1、c-myc、survivin表达增高,差异具有统计学意义(P<0.05)。(5)CaMKⅡ、β-catenin、cyclinD1蛋白与mRNA表达变化一致。结论:靶向沉默wnt5a基因促进Jurkat细胞恶性增殖,抑制凋亡。作用机制可能为:下调wnt5a后,解除了非经典wnt信号通路对β-catenin的抑制,从而下游cyclinD1、c-myc、survivin靶基因上调,改变细胞周期并抑制凋亡,导致Jurkat细胞进一步增殖。
- 顾晓艳徐酉华沈亚莉胡艳妮李瑞燕伍俞霓
- 关键词：WNT5AJURKAT细胞RNAI白血病
- siRNA干扰的wnt5a对Jurkat细胞增殖、调亡、细胞周期的影响及机制研究
- 第一部分靶向wnt5a siRNA重组腺病毒构建及鉴定
目的:
构建携带靶向wnt5a小干扰RNA(wnt5a siRNA)的重组腺病毒质粒,收获高滴度的重组腺病毒,为进一步研究提供载体。
方法:
...
- 顾晓艳
- 关键词：细胞增殖细胞周期WNT信号通路靶向治疗
- 抑制GSK-3β活性促进NF-κB诱导的儿童急性淋巴细胞白血病细胞凋亡
- 2010年
- 核转录因子-κB(NF-κB)是维持急性淋巴细胞白血病(ALL)细胞生存的关键因子.近年来发现,糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)可以正性调控NF-κB的活性.本研究通过抑制GSK-3β活性初步探讨ALL细胞中GSK-3β在NF-κB诱导细胞凋亡中的作用机制.收集ALL患儿骨髓单个核细胞,采用免疫荧光细胞化学方法检测到ALL细胞核内GSK-3β有明显聚集.体外培养ALL细胞后经GSK-3β抑制剂氯化锂(LiCl)和SB216763处理,采用Western印迹和EMSA检测发现,ALL细胞核内GSK-3β表达下降,而NF-κBP65蛋白无明显变化,但是其活性明显降低.同时RT-PCR结果显示,NF-κB下游抗凋亡基因存活素(survivin)的表达随之下降,AnnexinV-PE/7-AAD双染流式细胞仪检测结果证实,ALL细胞凋亡明显增加(P<0.01).该结果表明,抑制GSK-3β活性可以下调NF-κB的转录活性,并通过下调抗凋亡基因存活素的表达而促进ALL细胞的凋亡.
- 胡艳妮徐酉华顾晓艳李瑞燕
- 关键词：糖原合成酶激酶-3Β儿童急性淋巴细胞白血病核转录因子-ΚB存活素细胞凋亡
- Wnt5a 修饰的bMSCs 对白血病小鼠造血及白血病细胞生长的影响被引量：1
- 2011年
- 目的: 探讨Wnt5a基因修饰的骨髓间充质干细胞(bMSCs)对急性髓系白血病小鼠体内造血和白血病细胞生长的影响。方法:外周血瑞氏染色、骨髓流式细胞仪鉴定移植性HL60人白血病重度联合免疫缺陷(SCID)小鼠模型。造模成功的SCID小鼠,随机分为实验组(A组:Ad5-Wnt5a-bMSCs+模型小鼠);对照组(B组:Ad5-GFP-bMSC+模型小鼠;C组:bMSC+模型小鼠;D组:模型小鼠)。RT-PCR检测外源性Wnt5a基因经骨髓腔移植入白血病小鼠模型后的定植情况。骨髓MSC及CFU-Mix培养、流式细胞仪、组织细胞化学及组织病理检测白血病小鼠移植前后各组外周血、骨髓、肝、脾、肾中的白血病细胞以及骨髓造血的变化。结果:成功建立急性髓性白血病模型;外源性Wnt5a基因转染人bMSCs,转染率达37.38%。外源性Wnt5a基因成功定植于受体骨髓中。Wnt5a基因修饰bMSCs移植后,与对照组比较,实验组SCID小鼠生存率明显提高,差异有统计学意义(P<0.05);外周血有核细胞及瘤细胞计数明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);CFU-Mix和MSC集落生长恢复较快,集落数明显增多,差异有统计学意义(P<0.05);小鼠骨髓、肺、肝、脾、肾CD33阳性率明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:Wnt5a基因修饰的bMSCs在体内能有效地抑制白血病细胞生长,支持骨髓造血。
- 沈亚莉徐酉华顾晓艳
- 关键词：HL60
