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黑曲霉糖化酶cDNA的改造及其在酿酒酵母中的表达被引量：7: 1998年; 应用PCR技术扩增黑曲霉糖化酶cDNA不含非编码区50bp的5’端740bp的序列与该cDNA3’端1400bp的序列连接，获得切除了5’端非编码的糖化酶cDNA。将改造后的cDNA插到质粒pMA91的酵母PGK基因的启动子和转录终止信号之间，构建了含黑曲霉糖化酶基因的表达载体pMAG17。用原生质体转化法将重组质粒pMAG17引入酿酒酵母GRF18。酿酒酵母GRF18转化子在淀粉平板上产生水解透明圈，表明糖化酶已在酵母中表达并分泌至培养基中。测定转化子的胞外酶活力及淀粉水解率。结果表明：改造后的糖化酶基因在酵母中的表达、分泌水平及水解淀粉的能力都高于未改造的基因。; 李文清罗进贤叶若邻徐柏年; 关键词：黑曲霉糖化酶基因改造酿酒酵母 CDNA

枯草杆菌诱导型高效表达-分泌系统的构建被引量：6: 2001年; 利用枯草杆菌蛋白酶缺陷突变株,sac B诱导基因及degQ,degU(Hy)正调控基因构建了诱导型表达-分泌系统以解决枯草杆菌分泌大量胞外蛋白酶和外源基因表达水平不高的问题,采用共转化方法将枯草杆菌IA95的degU(Hy)突变引入枯草杆菌蛋白酶缺陷突变株DB403,获得degU(Hy)和蛋白酶三缺陷的新菌株DB1342;利用sacB基因的启动子——信号序列及芽孢杆菌的两个正调控基因degQ和degU(Hy)构建了诱导型表达-分泌载体pURT3及pURTQ4,由DB1342突变株及pURT3及pURTQ4载体组成枯草杆菌诱导型高效表达和分泌系统.在本系统中内源基因sacB的表达量是原菌株DB403的296倍,将地衣杆菌α-淀粉酶基因引入本系统后在sacB,degQ.degU的调控和蔗糖的诱导下,α-淀粉酶的表达量是在DB403中的140倍,证实degQ及degU对基因表达的增强作用是叠加的.; 吴青罗进贤徐柏年李文清; 关键词：诱导型枯草杆菌 Α-淀粉酶外源基因诱导基因调控基因

波氏假丝酵母启动子的克隆及新霉素基因的表达被引量：1: 2001年; 报道了波氏假丝酵母（Ｃａｎｄｉｄａｂｏｉｄｉｎｉｉ）启动子的克隆，将克隆的启动子与Ｎｅｏ基因重组构建了含Ｎｅｏｒ基因的表达载体ＹｅｐＮＰ１８１，转化波氏假丝酵母，实现了Ｎｅｏｒ基因在波氏假丝酵母中的表达，使波氏假丝酵母转化子能在含Ｇ４１８的抗性培养基上生长从而建立了Ｎｅｏｒ基因──Ｇ４１８选择系统，为外源基因在波氏假丝酵母中表达创造了条件．; 徐柏年吴江雪李文清罗进贤; 关键词：启动子克隆转化子

GST-EGF融合蛋白在大肠杆菌中的表达与纯化被引量：5: 1998年; 将小鼠ＥＧＦ基因克隆至谷胱甘肽Ｓ－转移酶（ＧＳＴ）融合表达载体ｐＧＥＸ－２Ｔ，转化大肠杆菌ＤＨ５α，获得高效表达，融合蛋白ＧＳＴ－ｍＥＧＦ经Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ－ＧＳＨ亲和层析柱纯化和凝血酶消化获得有免疫活性的ｍＥＧＦ。; 李文清徐柏年朱坚罗进贤; 关键词：基因表达大肠杆菌融合蛋白

ADK基因在酿酒酵母中的表达和ATP合成研究被引量：3: 2000年; 采用基因工程技术 ,将催化ATP合成的酶—ADK的基因克隆进表达载体YEpN181P2获得重组质粒YEpN ADK ,转化酿酒酵母GRF18后 ,ADK基因获得表达 .用重组菌株GRF18(YEpN ADK)发酵合成ATP其产率比对照菌株GRF18提高 75% .; 徐柏年张添元罗进贤吴青吴江雪; 关键词：酿酒酵母 ATP合成三磷酸腺苷

短小芽孢杆菌degQ基因的克隆与鉴定被引量：9: 1997年; degQ基因编码一个由46个氨基酸组成的多肽，能增强许多芽孢杆菌胞外酶基因的表达．以pMK4作克隆载体构建短小芽孢杆菌基因文库，并用DNA探针原位杂交法从中钓出degQ基因．对克隆基因的DNA序列进行了分析并证明克隆的短小芽孢杆菌degQ基因具有增强枯草杆菌蛋白酶和果聚糖蔗糖酶基因表达的能力．degQ基因克隆有助于研究芽孢杆菌的正调控机理并可望提高外源基因在芽孢杆菌中表达．; 罗进贤王凌张添元李文清徐柏年; 关键词：短小芽孢杆菌克隆

地衣芽孢杆菌α—淀粉酶基因在枯草芽孢杆菌中的诱导表达被引量：27: 1997年; 采用PCR技术扩增了sacB基因的启动子-信号序列,并将扩增的序列重组进含地衣芽孢杆菌α-淀粉酶基因的质粒载体上构建了含α-淀粉酶基因的分泌型表达载体pSA60。将pSA60转化枯草芽孢杆菌QB1098后,α-淀粉酶基因在sacB基因启动子-信号序列的调控和蔗糖的诱导下获得表达,表达产物分泌至胞外。; 王红革李文清徐柏年罗进贤; 关键词：Α-淀粉酶基因地衣芽孢杆菌枯草芽孢杆菌

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徐柏年