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张添元: 作品数：101 被引量：217H指数：8; 供职机构：中山大学更多>>; 发文基金：广东省自然科学基金国家自然科学基金广东省科技计划工业攻关项目更多>>; 相关领域：生物学医药卫生轻工技术与工程化学工程更多>>

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嗜铬粒蛋白N端片段基因在枯草杆菌中的表达及表达产物的活性分析被引量：7: 2004年; 嗜铬粒蛋白 (CGA)是存在于分泌细胞的由 43 9个氨基酸组成的可溶性蛋白。近年的研究发现CGA的N端具有抗血管收缩、抗细菌和抗真菌的功能。为了寻找高效低毒的抗真菌片段 ,利用PCR技术扩增了编码人嗜铬粒蛋白N端 1 76位氨基酸 (CGA1 76)的DNA片段 ,并将之克隆进本实验构建的枯草杆菌诱导型表达载体pSBPTQ ,获得含CGA1 76基因的重组质粒pSVTQ ,转化蛋白酶三缺陷的枯草杆菌DB40 3。经蔗糖诱导后 ,CGA1 76片段在枯草杆菌DB40 3 (pSVTQ)中获得表达 ,产物分泌到细胞外 ,分泌量约为 5mg L ,占总分泌蛋白的 13 3 %。测试了表达产物对几种丝状真菌和酵母的抑制作用 ,发现在 4μmol L的浓度下 ,枯草杆菌表达的重组CGA1 76对镰刀菌。; 李瑞芳罗进贤张添元; 关键词：枯草杆菌基因表达酵母丝状真菌

Canstatin-N基因在Pichia pastoris中表达及产物活性分析被引量：2: 2010年; 目的:应用P.pastoris的pAOX1表达系统胞内表达canstatin-N蛋白。方法:通过PCR DNA合成技术以及DNA的酶切和连接技术,除去pPIC9K分泌型表达载体的信号肽,并使其载体的多克隆位点的3′端融合his6纯化标签,获得新的载体pPIC9Ki。以含canstatin N端序列的pET-CTN质粒为模版,PCR法扩增1～89个氨基酸的267bp的canstatin的N端基因片段,将其连接于pPIC9Ki的多克隆位点,获得重组表达质粒pPIC9Ki-CTN-N,用电转法将pPIC9Ki-CTN-N转化P.pastorisGS115,通过G418抗性筛选获得工程菌GS115(pPIC9Ki-CTN-N)。通过摇瓶发酵甲醇诱导表达Canstatin-N蛋白。用蜗牛酶裂解P.pastoris细胞,SDS-PAGE分析蛋白表达情况,在鸡胚中进行活性分析。结果:在pAOX1的调控下,canstatin-N基因能在P.pastoris中经甲醇诱导表达,摇瓶发酵表达量为65mg/L,纯化的目的蛋白具有显著的抑制鸡胚尿囊膜血管生成的作用。结论:实现应用P.pastoris表达Canstatin-N蛋白,为Canstatin-N蛋白的规模化生产和进一步的药用研究奠定了基础。; 潘英文张爱联屈直张添元罗进贤; 关键词：P.PASTORIS 基因表达

趋化因子受体CCR5亲合短肽的筛选被引量：4: 2005年; 趋化因子受体5(CCR5)是HIV-1与宿主细胞结合的辅助因子之一,其功能缺失或被CCR5拮抗剂封闭则会阻止HIV-1感染细胞.为得到与CCR5特异结合的肽类拮抗剂,采用噬菌体展示技术,以稳定表达CCR5的CHO细胞(CHO/CCR5)作为靶标,通过噬菌体随机12肽库筛选与CCR5特异结合的多肽;经过四轮筛选后,挑选20个阳性噬菌体克隆进行测序,从中得到11个含有AFDWTFVPSLIL序列的小分子肽.含该序列的噬菌体能与抗人CCR5单抗(2D7)竞争性结合CCR5,且合成肽AFDWTFVPSLIL对趋化因子RANTES与CHO/CCR5的结合具有明显的抑制作用,初步证明该小肽与CCR5具有特异性结合作用.; 王芳宇张添元罗进贤李瑞芳甘菁菁官文俊肖凡; 关键词：噬菌体展示 CHO细胞

脂质体介导人纤溶酶原k1-3基因诱导人肝癌细胞凋亡: 2005年; 目的观察脂质体介导人纤溶酶原k13基因诱导体外培养人肝癌细胞凋亡的效应。方法构建人纤溶酶原k13基因真核表达载体pcDNAk13并以阳离子脂质体介导pcDNAk13转染体外培养人肝癌细胞,经Heochst33258染色后,在荧光显微镜下观察细胞核的形态。结果转染pcDNAk13组可见致密浓染的凋亡细胞核。结论脂质体介导人纤溶酶原k13基因能诱导体外培养人肝癌细胞凋亡。; 陆幸妍张添元罗利琼; 关键词：阳离子脂质体人肝癌细胞细胞凋亡

一种快速调控水稻内源miRNA活性的方法: 本发明公开了一种快速调控水稻内源miRNA活性的方法。该方法通过以下步骤实现：一、根据目标miRNA成熟体序列设计并合成反义寡核苷酸或模拟物（mimics）；二、利用糖溶液将目标miRNA的反义寡核苷酸或模拟物经糖转运蛋...; 唐恬何涟文海军张添元吴仲义施苏华

一种应用淀粉生产乙醇的方法: 本发明公开了一种应用淀粉生产乙醇的方法，属于生物技术领域，首先从大麦基因组中扩增α淀粉酶基因，从黑曲霉菌基因组中扩增糖化酶基因，从解淀粉假单胞杆菌基因组中扩增异淀粉酶基因；利用α淀粉酶基因、糖化酶基因和异淀粉酶基因构建成...; 张爱联罗进贤张添元刘振旺易小平谭燕华张泽华; 文献传递

含笑属叶绿体基因组限制位点变异性研究被引量：2: 1994年; 采用不连续蔗糖梯度离心法分别提取白兰(Michelia alba DC.)和含笑(Michelia figo spreng.)叶绿体DNA。经BamHI酶切后,白兰和含笑分别产生21和25个片段,其中白兰的各酶切片段在含笑的限制酶图谱对应位置均观察到,白兰和含笑叶绿体基因组大小分别为139.74和143.18kb。两基因组间的遗传距离为0.029。叶绿体DNA限制酶酶切分析可以在分子水平上讨论植物间的系统关系。; 王艇罗进贤张宏达张添元李文清王红革; 关键词：叶绿体基因组含笑属

用GAP启动子在毕节酵母中组成型表达人血管抑制素(英文)被引量：16: 2004年; 为探索用GAP启动子 (PGAP)取代AOX1启动子 (PAOX1) ,在毕节酵母 (P .pastoris)中组成型表达外源蛋白的可能性 ,应用PCR方法从P .pastoris染色体中扩增了GAP启动子 ,以其取代诱导型表达载体 pPIC9K上的PAOX1,构建了组成型表达载体 pGAP9K。将人血管抑制素 (AS)基因重组于pGAP9K的多克隆位点 ,获得含AS基因的重组质粒 pGAP9K AS。转化P .pastorisGS115 ,对获得的高拷贝转化子P .pastorisGS115 (pGAP9K AS)进行组成型表达 ,同时以诱导型转化子P .pastorisGS115 (pPIC9K AS)作为对照。SDS PAGE结果显示 :组成型转化子于培养 4d后AS的表达水平已达到高峰 ,分泌量为 5 8mg/L ;而诱导型转化子诱导 4d后表达的AS仅是组成型表达的 70 % ,诱导 6d后达到高峰 ,表达量也只是组成型表达系统表达高峰时 (4d)的 86 %。CAM分析和抗癌实验结果显示 :P .pastorisGS115 (pGAP9K AS)和P .pastorisGS115 (pPIC9K AS)表达的AS均具有抑制血管生成和C5 7BL/ 6J实验小鼠的B16黑色素瘤的生长 ,其平均瘤重抑制率分别达到 90 6 1%和 90 5 4 %。以上结果表明 ,以GAP启动子构建的组成型表达系统具有发酵时间较短、表达水平较高、不用甲醇诱导、操作系统比较简单等优点 ,PGAP可以取代PAOX1在P .pastoris中表达AS及其他外源蛋白。; 张爱联罗进贤张添元陈守才官文俊; 关键词：组成型表达毕节酵母 GAP启动子抗血管生成抗肿瘤

人纤溶酶原K1-3功能区基因在毕节酵母中的表达和产物的抗癌活性分析: 血管生成是肿瘤组织赖以生长和转移的基础.肿瘤新生血管的生成为其继续增殖提供充足的营养和氧气.1994年发现纤溶酶原的1-4 kringle区(K1-4)是一个血管生成抑制因子,它通过抑制血管生成来抑制肿瘤的生长和转移....; 罗进贤张添元; 文献传递

内皮细胞抑制素酵母工程菌的高密度发酵及产物纯化和活性分析被引量：4: 2004年; 用 30升发酵罐研究了内皮细胞抑制素 (EDN)酵母工程菌P .pastorisGS115 (pPIC9K EDN)的高密度发酵工艺 ,摸索出发酵培养基 ,pH ,诱导时间等对菌体生长和基因表达的影响 .根据所确定的最适条件进行发酵 ,通过补料和甲醇诱导 4 8h后 ,工程菌GS115 (pPIC9K EDN)生物量的A60 0 值达到 2 5 0 ,分泌量为 15 0mg L .发酵液经StreamlineSP ,SepharoseSPFF离子交换柱和Sepharose HeparinHiTrap亲和柱纯化 ,产物纯度达 97%以上 ,回收率为 6 0 % .Western印迹结果表明 ,酵母工程菌GS115 (pPIC9K EDN)表达的重组人内皮细胞抑制素具有天然EDN的免疫原性 .MTT法和抑癌实验结果显示 :纯化产物能抑制人脐静脉内皮细胞的增殖并能抑制移植于小鼠的黑色素瘤的生长 ,其平均抑瘤率是 94 2 % .; 吴江雪符武钊张添元罗进贤吴群悦; 关键词：内皮细胞抑制素纯化毕赤酵母

张添元

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