骆利敏 作品数:29 被引量:153 H指数:9 供职机构: 解放军第458医院 更多>> 发文基金: 国家重点基础研究发展计划 广东省自然科学基金 国家自然科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 更多>>
乙型肝炎病毒多表位治疗性抗原基因的合成、表达及抗原性研究 被引量:10 2003年 目的研究乙型肝炎病毒多表位治疗性疫苗基因的合成、表达及其产物的抗原性。方法设计、并合成乙型肝炎病毒多表位抗原基因BPT,克隆入融合表达载体pWR450-1,构建重组质粒PWR/BPT。在大肠杆菌中表达乙型肝炎多表位抗原蛋白并纯化该蛋白,并用Western-blotting方法初步检测该抗原蛋白的抗原性。结果成功构建了融合表达载体PWR/BPT,在大肠杆菌中表达出乙型肝炎多表位抗原蛋白,Western-blotting 检测显示该蛋白具有良好抗原性。结论HBV多表位治疗性抗原基因的设计是成功的,其在大肠杆菌中表达的重组融合蛋白具有良好的抗原性,可能是较理想的HBV治疗性疫苗候选物。 骆利敏 李明 夏虎 黄建生 陈百虹 王萍关键词:乙型肝炎 多表位 治疗性疫苗 乙型肝炎多表位抗原基因的克隆表达及免疫原性研究 乙型肝炎病毒(HBV)是一种DNA病毒,属嗜肝DNA病毒科,HBVDNA的基因组约含3200个碱基对,为环状部分双链DNA。它包括两个链,一个长度固定的负链和另一长度不定的正链。HBVDNA负链有四个开放区,分别称为S、... 骆利敏关键词:多表位抗原 乙型肝炎病毒 免疫应答 克隆表达 文献传递 应用NASBA定量检测HCV RNA的研究进展 被引量:11 2002年 NASBA(nucleicacidsequence basedamplification)即核酸序列依赖性扩增法 ,是由一对引物介导的、连续均一的、体外特异性核苷酸序列等温扩增的RNA新技术。反应在 42℃进行 ,可在 2h内将RNA模板扩增约 10 9倍。 骆利敏 黄建生 李明关键词:NASBA HCV 丙型肝炎 TNP-470联合重组人内皮抑素抑制小鼠肺腺癌生长的研究 被引量:13 2003年 目的 :观察TNP 4 70和重组人内皮抑素 (recombinanthumanendostatin ,rhES)联合治疗对小鼠肺腺癌LA795肿瘤生长的抑制作用。方法 :用甲醇诱导能高效分泌表达重组人内皮抑素 (rhES)的毕赤酵母菌株分泌表达rhES ,将皮下接种LA795肺腺癌细胞的T739雄性近交系小鼠随机分成 3组 ,每组各 10只 ,分别给予PBS ,rhES及TNP 4 70 +rhES皮下注射 ,每日 1次 ,连续 14d ;观察各组小鼠肿瘤生长情况 ,游标卡尺测量肿瘤体积大小。断颈处死小鼠 ,原位肿瘤免疫组化观察肿瘤内部微血管密度 (microvesseldensity ,MVD)。结果 :经甲醇诱导 ,毕赤酵母重组菌分泌表达rhES ,并应用肝素亲和层析将其纯化 ;动物试验显示与PBS对照组比较 ,rhES治疗组及rhES +TNP 4 70治疗组均明显抑制小鼠肿瘤的生长 (P <0 .0 1) ,TNP 4 70 +rhES组与rhES组比较亦有显著性差异 (P <0 .0 1)。原位肿瘤免疫组化显示联合治疗组抑制血管生成更显著 (P <0 .0 1)。结论 :TNP 4 70联合rhES治疗对小鼠肺腺癌LA795生长的抑制效果比单独使用rhES的治疗效果更佳 ,具有良好的协同治疗作用。 夏虎 骆利敏 文金序 佟万成关键词:TNP-470 重组人内皮抑素 小鼠 肺腺癌 HLA-Cw-KIR介导的信号通路在肝脏移植中的免疫调节作用:附一例 骆利敏 夏虎 陈小平 罗敏 肖露露中国布鲁杆菌插入序列基因多态性的研究 被引量:4 2006年 目的分析国内83株布鲁杆菌基因组的插入序列(IS)IS711的遗传多态性。方法提取布鲁杆菌DNA,经内切酶EcoRI酶切、琼脂糖凝胶电泳、Southern转印后,与地高辛标记的IS711探针杂交,以酶免疫试验检测信号,比较布鲁杆菌各株的IS711指纹图谱。结果不同布鲁杆菌菌株在IS711探针杂交图谱上有明显的多态性,根据杂交的条带数及片段大小的差异,83株布鲁杆菌分属15个IS型。以IS10型分布最为广泛,其次是IS3型,其他型别则较分散,有的IS型只存在于某个菌株。结论布鲁杆菌插入序列IS711在基因分布上存在多态性。 骆利敏 李明 芮勇宇 王文敬 李妍 李莉关键词:多态性 不同因素对RSV感染人支气管上皮细胞表达胸腺基质淋巴细胞生成素的影响 被引量:4 2010年 目的探讨不同处理因素对呼吸道合胞病毒(RSV)感染人支气管上皮细胞16HBE表达胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)的影响。方法用Hep-2细胞扩增病毒,并进行病毒毒力鉴定;试验分6组:对照组、RSV组、RSV/anti-TLR3组、RSV/IFN-γ组、RSV/IL-4组、RSV/地塞米松组,感染复数(MOI)为2的RSV病毒液吸附感染1h,不同处理因素分别加入培养基共培养;培养6h后用实时荧光定量RT-PCR检测各组细胞TSLPmRNA表达水平变化,培养24h后应用Western blotting检测各组细胞TSLP蛋白表达水平变化。结果经Hep-2细胞培养扩增获得足量RSV病毒;RSV感染16HBE细胞6h,可使细胞TSLPmRNA表达水平增高(是对照组的1.63±0.08倍)(P<0.001);加入anti-TLR3阻断TLR3受体,细胞TSLPmRNA表达量下降(P=0.034);加入重组人IFN-γ,细胞TSLPmRNA表达水平下降(P<0.001);加入重组人IL-4,TSLPmRNA表达水平升高(P=0.025);加入地塞米松,细胞TSLPmRNA表达明显下降(P<0.001)。RSV感染后细胞TSLP蛋白表达量升高,约为对照组的1.9倍(P<0.001),TLR3抗体阻断TLR3受体可使TSLP表达降低,但与RSV感染组比较无统计学意义(P=0.114),IFN-γ降低TSLP表达升高(P=0.020),IL-4协同RSV感染引起的TSLP表达升高(P=0.014),地塞米松显著抑制RSV感染细胞TSLP表达(P<0.001)。结论RSV感染引起人支气管上皮细胞16HBE合成TSLP增加;IFN-γ、anti-TLR3和地塞米松能抑制RSV感染引起的16HBE细胞TSLP合成,而IL-4能协同RSV感染促进TSLP合成。 夏虎 骆利敏 于化鹏 蔡绍曦关键词:胸腺基质淋巴细胞生成素 呼吸道合胞病毒 干扰素-Γ 布鲁氏菌猪种标准株外膜蛋白OMP25的原核表达 被引量:4 2006年 目的克隆布鲁氏菌外膜蛋白Omp25基因并构建基因的原核表达系统。方法用聚合酶链反应技术扩增得到布鲁氏菌基因组,得Omp25基因片段,T-A克隆后测定核苷酸序列,将目的基因定向插入原核表达载体pGEX-4T-1,经双酶切和DNA测序测定,将构建的重组质粒转化大肠杆菌(E.coliHB101,TOP10),经IPTG诱导后,用SDS-PAGE检测重组蛋白rOmp25表达情况。结果经DNA测序显示Omp25DNA序列和插入位点正确,成功构建了重组质粒pGEX-4T-1-Omp25,经IPTG诱导,特异性表达出以包涵体形式存在48kDa的Omp25融合蛋白。结论制备、克隆了布鲁氏菌外膜蛋白Omp25基因片段,并在大肠杆菌中表达出Omp25融合蛋白。 江洁华 骆利敏 李明 芮勇宇 廖伟娇 徐军关键词:布鲁氏菌 免疫 乙肝多表位抗原基因非融合表达载体的构建和表达 2008年 目的:研究乙型肝炎病毒(HBV)多表位基因的在原核载体中的克隆、游离表达及其产物的抗原性。方法:设计、并合成HBV多表位抗原基因BPT,克隆入原核表达载体pBAD/gIIIA,进而转化Top10大肠杆菌,阿拉伯糖诱导表达出HBV多表位抗原蛋白(B-BPT),并用Western blot方法初步检测该抗原蛋白的抗原性。结果:成功构建了原核表达载体pBAD/BPT,在大肠杆菌中表达出HBV多表位抗原蛋白B-BPT,Western blot检测显示该蛋白具有良好抗原性。结论:HBV多表位抗原基因的设计是成功的,其在大肠杆菌中表达的非融合蛋白具有良好的抗原性,可能是较理想的HBV治疗性疫苗候选物。 骆利敏 夏虎 李灼亮 余宙耀 刘树人 李明关键词:乙型肝炎病毒 多表位 治疗性疫苗 中国布鲁氏菌16s-23s rRNA间隔区多态性研究 被引量:4 2005年 目的利用16 s-23 s rRNA间隔区(ITS)的多态性,对中国布鲁氏菌种间或种内生物型进行鉴别,评价ITS作为基因标识物的意义,寻找适合布鲁氏菌分型研究的基因标识物。方法应用聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)分析技术,对中国120株布鲁氏菌的ITS进行分析和筛选,测序结果与Genbank中的布鲁氏菌ITS序列进行比较分析。结果对16 s-23 s rRNA间隔区的SSCP结果分析,得到4种不同的带型(ⅠI、I、Ⅲ、Ⅳ),测序序列有3个位点的差异,达到99.87%的一致性。结论中国布鲁氏菌的ITS序列高度保守,具有一定探讨其作为布鲁氏菌属种内分型的基因标识的价值。 王文敬 芮勇宇 陈瑶 骆利敏 李明关键词:布鲁氏菌 16S-23S 多态性 PCR-SSCP 测序